双链DNA定量检测
· 简便易操作 :即用型预混液,无需配制工作液,简化操作步骤
· 高的灵敏度:准确定量0.2 -100 ng dsDNA
· 强的特异性:特异性的检测dsDNA,对一些常规污染物具有较好的耐受性
· 染料结合速度快:2 min 内即可达到饱和
· 高的稳定性:严格控制标准品生产工艺,保证批次间稳定性
1.简便易操作
实验操作过程中无需配制工作液,直接将预混液分装到0.5 ml管中加入标准品或者检测样本,使用Qubit Fluorometer 2.0、3.0、4.0 进行数据读取即可。
图1. Equalbit 1 × dsDNA HS Assay Kit 操作流程图
2.高的灵敏度
对12个不同浓度的dsDNA样本,分别使用Vazyme #EQ121和T*公司同类产品进行线性测定,利用Qubit Fluorometer 3.0读取荧光值。数据表明 dsDNA样本总量在0.2-100 ng区间内具有良好的线性关系。
图2. 0.2-100 ng线性关系比较
将Vazyme #EQ121的标准品2梯度稀释到理论浓度0.2 ng/μl,6个实验人员同时进行实验操作,结果显示在接近临界测试点,Vazyme #EQ121与T*公司同类产品偏差率(Vazyme #EQ121和T*公司同类产品差值/T*公司同类产品测量值)在10%以内。
图3. 不同操作人员测试低浓度结果图以及偏差率展示
A、B、C、D、E、F代表不同操作人员
3.强的特异性
在线性范围内(0.2-100 ng dsDNA)测试12个DNA样本、等质量的12个RNA样本、等质量的12个DNA+RNA混合样本,每个样本分别使用Vazyme #EQ121和T*公司同类产品进行检测,结果显示Vazyme #EQ121能特异性地结合dsDNA,即使在有RNA存在的情况下,仍能准确定量dsDNA,且性能与T*公司同类产品相当。
图4. EQ121与T*公司同类产品dsDNA特异性检测图
4.染料结合速度快
对四个不同浓度的dsDNA样本,分别使用Vazyme #EQ121和T*公司同类产品两款试剂盒,从加样1 min开始,每隔1 min检测一次,记录5 min内样本的数值变化情况。结果显示,两个Kit均在加样5 min后检测结果与加样1 min后检测结果偏差均在10%以内。说明两个Kit结合dsDNA样本速度一致,2 min内即可达到饱和。
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图5. EQ121与T*公司同类产品dsDNA染料结合速度图
5.耐污染能力强
将混有杂质的dsDNA样本分别使用EQ111和T*公司同类产品进行实验,利用Qubit Fluorometer 3.0进行浓度测定,若检测结果与T*公司同类产品数值偏差在10%以内则认为结果准确。当待测样本中含有污染物时,EQ121与T*公司同类产品对不同的杂质有着相同的耐受能力。
Equalbit 1 × dsDNA HS (High Sensitivity) Assay Kit是一种简便、灵敏、准确的双链DNA (dsDNA)荧光定量检测试剂盒。本试剂盒包括预混工作液(含荧光染料)和dsDNA标准品。该试剂盒对dsDNA样本在0.2 - 100 ng区间具有良好的线性关系,可以对浓度为10 pg/μl到100 ng/μl 的样本进行准确定量,对于一些常规的污染物,如RNA、盐、游离的核苷酸、蛋白质、溶剂、去污剂等都具有良好的耐受性。本试剂盒操作简单,直接向工作液中加入适量的样本,通过Qubit荧光仪进行检测即可。
2 ~ 8℃保存;2 ~ 8℃运输;推荐Equalbit 1 × dsDNA HS Standard #2于-30 ~ -15℃长期存放。
Q1:EQ121操作的体验与EQ111不同,能看到加样的波纹,这种情况正常吗?
A1:这个是正常情况,因为EQ121是预混液,里面加了一些稳定剂,加样时能看到明显的样本波纹。
Q2:标准品荧光值低?
A2:标准品没有一个确定的荧光值,一般认为标2的荧光值在标1的50倍以上即可,这个可以做复孔验证。同时荧光值与Qubit仪器有关,新机荧光值比旧机标准品荧光值大。
Q3:环境会影响测量值吗?
A3:会,EQ121里面的染料在不同的温度下对应的荧光信号强弱会有区别,一般在低温测出的值会偏大,高温的值会偏小。测量之前切勿用手握着EP管进行避光。
Q4:EQ121可以使用酶标仪进行浓度测定吗?
A4:可以使用酶标仪进行测定的。
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