ExFect Transfection Reagent
低毒性的高分子聚合物转染试剂
贴壁或悬浮细胞的质粒DNA转染
对多种细胞均有较好的转染效果，结果重复性好
低细胞毒性
培养基可含或不含血清，可以用PBS 或无血清培养基稀释质粒，转染过程中不需换液
图1.绿色荧光蛋白表达情况
使用本品及商用lipofectamine 系列产品转染pEGFP-C1 质粒至HEK293、HepG-2、MCF-7、NIH3T3细胞24 h 后，绿色荧光蛋白表达情况。所有转染均在24 孔板中进行，转染质粒量为1 μg/ 孔。
ExFect Transfection Reagent 是一种基于生物可降解的高分子树枝状聚合物的转染试剂，适用于多种细胞的DNA 转染。由于所使用的活化树枝状聚合物具有均一的大小和确定的形状，因此可实现高重复性的转染结果。ExFect Transfection Reagent 携带DNA 进入细胞后，可迅速释放DNA，并被快速降解，降低了对细胞的毒性。转染试剂-DNA 复合物可以直接加入完全培养基中，血清和抗生素不影响其转染效果，转染前后都不需要更换培养基，操作十分简便。
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组分 |
T101-01 |
T101-02 |
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ExFect Transfection Reagent |
1 ml |
4 × 1 ml |
4-8°C 保存，不可冷冻。
Q1：转染效率偏低
A1：（1）Exfect2000 与DNA 的比例、DNA 用量不合适
通过预实验测试ExFect2000 与DNA 的比例( 在1~3 μl Exfect2000/μg DNA 范围内尝试) 及DNA 的使用量( 以24 孔板为例，在0.5~1 μg/ 孔范围内尝试后，如不能满足要求，可适当提高DNA 用量)。在后续的实验中选择转染效率高、细胞毒性低的比例进行转染；
（2）将Exfect2000 和DNA 原液直接混合后加到培养基中
Exfect2000 和DNA 需分别在无血清培养基条件下按一定比例稀释后再进行混合孵育；
（3）转染时细胞密度不合适
多数情况下，当细胞汇合度达到60%~80% 时转染效率较高。但是细胞类型不同，转染密度也不尽相同。推荐通过预实验寻找较优化的转染密度，并在后续实验中保持这个密度；
（4）DNA 质量偏低( 降解或包含内毒素)
为实现高效率、低毒性的转染，应使用高质量的DNA( 高纯度、无菌、无内毒素)；
（5）Exfect2000/DNA 复合物的包装体系中含有血清
若包装反应体系中存在血清，转染试剂/DNA 复合物将无法正常形成；
（6）转染体系中存在转染抑制因素
当转染体系中存在多聚阴离子聚合物时( 例如：硫酸葡聚糖、肝素等) 转染将无法正常进行。因此应避免上述物质存在于细胞转染体系中；
（7）细胞状态偏差
传代次数太少或者太多都将导致细胞转染效率的改变。为了提高转染效率以及转染稳定性，应尽量使用传代适度的细胞系，并尽量在平行实验时保持细胞传代次数的一致性。
(8) 注意观察试剂是否结冰，结冰后转染效率会变差。
Q2：转染过程中细胞大量死亡。
A2：(1) 如果细胞不在说明书标注范围内，可查阅历年文献，根据文献中选择的转染试剂进行选择（阳离子聚合物/阳离子脂质体）。
(2) 考虑质粒基因带毒，用GFP质粒进行阳性对照，确定转染试剂是否无问题。
(3) 如果重复数次毒性仍然较大，建议降低DNA与转染试剂的比例或用量。进行摸索。
(4) Exfect/DNA复合物转染时间过长。
多数情况下，在完全培养基中进行转染，24 h无需换液处理，但是培养时间过长可能会导致细胞状态较差，建议根据实验需要，合理安排后续实验时间。
(5) 转染时细胞密度不合适。
多数情况下，当细胞汇合度达到70%～80%时转染可以取得较高的转染效率。如果是生长非常快的细胞，如293t,密度可以降低至60%。细胞密度过低导致细胞生长缓慢，细胞对外来试剂变得较为敏感。细胞密度过高，会导致细胞发生接触抑制，加快细胞凋亡。
(6) Exfect/DNA过量。
转染试剂过量会导致较高的细胞毒性。尝试降低转染试剂的使用比例或者减少用量。
(7) Exfect/DNA复合物加入培养基时分布不均匀。
局部转染试剂/DNA复合物浓度过高是导致细胞毒性偏高最常见的原因之一。应在孔中不同位置滴加复核并，并在复合物添加到培养基之后，立即平置培养皿，并前后、左右交替晃动。
(8) 细胞状态偏差。
传代次数太少或者太多都将导致细胞对转染试剂毒性敏感度的改变。因此应尽量使用适度传代的细胞系，降低细胞代数差异对实验结果造成的影响。
Q3：如何验证转染效率？
A3：（1）可在质粒上插入一个GFP绿色荧光蛋白基因，或者连入化学发光标记，以荧光强度来侧面反映质粒的转染效率；
（2）可在转染的同时，另做1-3个孔的GFP质粒转染（载体需与目的基因连接的载体相同）；
（3）如果想要精确的结果，可以提取转染后细胞内的基因组，用qPCR定量目的基因；
Q4：试剂是否可以转染RNA、siRNA？
A4：不可以。
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