PNGase F（套装）
一款释放N-连接糖的糖苷内切酶
1. 从糖肽及糖蛋白上释放完整的 N-连接糖
2. 表征蛋白质是否糖基化
3. 用于分子量检测或晶体学研究时去糖基化蛋白质的制备
4. N-糖基化糖蛋白的结构和功能研究
5. 糖基化位点的确定
PNGase F 是一种主要由脑膜炎脓杆菌等革兰氏阴性菌分泌的酰胺水解酶，本制品为 E. coli 表达的和平空间站伊丽莎菌（Elizabethkingia miricola，formerly Flavobacterium meningosepticum）基因编码的重组蛋白。PNGase 可以将N-连接糖蛋白的高甘露糖、杂化和复合寡糖从蛋白上切开，切割位点发生在最内侧的 N-乙酰葡萄糖胺（GlcNAc）和天冬酰胺残基之间的酰胺键，酶切后天冬酰胺转变为天冬氨酸(图1)。
诺唯赞同时提供无甘油版本PNGase F(Glycerol-free)，供需进行HPLC和/或质谱等下游分析的客户选用。
1. PNGase F 几乎可以水解糖肽/糖蛋白中所有 N-连接糖
2. 无糖苷内切酶F1、F2和F3活性
3. 能在自然或变性条件下使用
4. 纯度≥95%
某糖基化蛋白采用PNGase F处理前后结果：
使用方法
1．用去离子水溶解 1-20 μg 糖蛋白，加入 1 μl 的 PNGase F Buffer1 (10×)，用去离子水定容到 10 μl ；
2．100°C 孵育 10 min；
3．加入2 μl 的 PNGase F Buffer2 (10×)，2 μl 的 PNGase F Buffer3 (10%)，轻轻吹打混匀；
4．加入 1-2 μl 的 PNGase F，加去离子水到 20 μl ，轻轻吹打混匀；
5．37°C 孵育 60 min；
6．用于 SDS-PAGE 分析或 HPLC 分析。
| 组分 | 成分 | RM1023KA-00 | RM1023KA-01 |
| PNGase F（糖苷酶） | N/A | 15000 U | 75000 U |
| PNGase F Buffer1 (10×) | 5% SDS, 400 mM DTT | 1 ml | 1 ml |
| PNGase F Buffer2 (10×) | 500 mM Sodium Phosphate(pH 7.5 @ 25°C) | 1 ml | 1 ml |
| PNGase F Buffer3 (10%) | 10% NP-40 | 1 ml | 1 ml |
| 组分 | 成分 | RM1024KA-00 | RM1024KA-01 |
| PNGase F(Glycerol-free) | N/A | 15000 U | 75000 U |
| PNGase F Buffer1 (10×) | 5% SDS, 400 mM DTT | 1 ml | 1 ml |
| PNGase F Buffer2 (10×) | 500 mM Sodium Phosphate(pH 7.5 @ 25°C) | 1 ml | 1 ml |
| PNGase F Buffer3 (10%) | 10% NP-40 | 1 ml | 1 ml |
保存：-30 ~ -15℃保存，12个月稳定，避免反复冻融；
运输：干冰运输。
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Q1：PNGase F可以耐受哪些试剂成分？
A1：在1.0%左右的去垢剂存在时，酶活几乎不受影响；
稳定试剂，非洗涤剂和微量有机溶剂会微弱影响反应速率；
尿素对PNGase F的活性有一定影响，低浓度下（<5 M）可保留部分活性；
SDS对PNGase F的活性有影响，若在变性条件下反应，需添加终浓度为1%的NP-40从而抵消影响。
Q2：变性和非变性条件下蛋白去糖基化的区别是什么？
A2：蛋白质不变性处理，其二级和三级结构会阻碍PNGase F到达碳水化合物的切割位点，所以在非变性条件下进行去糖基化处理时，可能需要增加一定酶量和/或延长反应时间。
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