Recombinant Enterokinase(High specificity)
高比活高特异性重组肠激酶
1. 用于切除重组蛋白N端融合标签,使用DDDDK作为酶切位点,用EK酶切,无残留氨基酸;
2. 用于活化胰蛋白酶原;
3. 生物制药领域常用于重组蛋白、多肽类药物的生产制备,例如BNP、GLP-1及其类似物等。
肠激酶(Enterokinase,EK)是一种常见的丝氨酸蛋白酶,可以专一识别DDDDK序列并在赖氨酸残基的C端进行切割。本品在天然肠激酶轻链片段的基础上进行突变改造,具有更高的比活和酶切特异性,可以在较宽的pH范围(4.5-9.5)和温度范围(4-45℃)内进行有效切割。
产品名称 | Recombinant Enterokinase(High specificity) |
表达宿主 | 重组E.coli |
性状 | 澄清透明、无沉淀浑浊和其他固体杂质 |
分子量 | 27.2±3.0 kDa |
纯度(SDS-PAGE) | ≥90% |
储存条件 | -30℃~-15℃ |
有效期 | 2年 |
1. 特异性:特异性显著优于普通肠激酶
2. GMP级:生产过程符合GMP要求,可提供完整的质量文件
3. 无动物源性:重组生产,生产过程不使用任何动物源原料,无外源性病毒污染
4. 供应稳定:质量和批量稳定,可保障稳定供应
5. 规格定制:规格可根据客户需求定制
组分 | RM1025-00 | RM1025-01 | RM1025-02 | RM1025-03 |
Recombinant Enterokinase(High specificity) | 100 U | 1000 U | 10 KU | 100 WU |
储存稳定性:保存在-30℃~-15℃条件下,2年内稳定;
运输稳定性:干冰保温运输,运输过程不融化,活性稳定。
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1、融合蛋白的使用量?及酶切温度和酶切时间?
重组 EK:200-2000U 可酶切融合蛋白:0.1-1g/L (1L)
反应时间:25℃反应过夜或者24h,用 SDS-PAGE 或者 HPLC 检测酶切效果。
4℃反应酶切,需要将酶切时间延长至 48-64h,或增加 2-3 倍酶量。
2、如何在纯化过程中去除EK酶?
本司生产的肠激酶比活高,使用过程中加量较少,且特异性更高,可不考虑其除去。如果确实需要去除EK,建议的去除方法如下:
a. 使用亲和层析,可以利用苯甲脒亲和填料纯化去除,由于肠激酶是一种丝氨酸蛋白酶,可以在纯化时与苯甲脒填料结合,从而达到纯化目的。
b. 使用离子交换填料,PH 8.0条件下,肠激酶与DEAE填料结合,并且在0.15 M NaCl中可以被洗脱。可以利用目的蛋白与肠激酶电荷以及与DEAE胶的结合以及洗脱的不同条件将二者进行分离。
c. 本产品含有his标签,可以使用Ni柱亲和层析进行去除。
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