Mouse CD4+ T Cell Isolation Kit
小鼠CD4+ T细胞分选试剂盒
磁分细选，纯净无杂
小鼠CD4+ T细胞分离纯化
Vazyme小鼠CD4+ T细胞分选试剂盒可以从小鼠淋巴结、脾脏及其混合样本中分离、纯化CD4+T细胞。试剂盒使用阴性选择的方法，通过磁珠和 Streptavidin-Biotin系统去除非目的细胞，可以在16 min左右快速得到高纯度、高活性、无磁珠标记的目的细胞。
图 1 T细胞分选操作流程
纯度高：分选细胞的纯度可高达96%-99%
活性好：阴性选择，磁珠不与细胞直接接触
速度快：无需分离柱，16 min即可获得目的细胞
无刺激：分选后细胞无异常激活，不影响下游实验
1.分选纯度高，得率高
图 2 Vazyme 细胞分选试剂盒纯度和得率测试结果
使用 Vazyme 细胞分选试剂盒进行阴性选择获得的目的细胞有较高的纯度（图a）和得率（图b）。
2.细胞活性高，样本兼容广
图 3 Vazyme 细胞分选试剂盒分选后细胞活性检测（a）以及样本兼容性检测（b）
使用 SYTOX对分选前后的样本进行染色，相对于分选前细胞而言，使用 Vazyme T细胞分选试剂盒分离的细胞，活性基本保持不变（图a）。此外，Vazyme T细胞分选试剂盒可以兼容脾脏、淋巴结及其混合样本（图b）。
2 ~ 8℃保存，切勿冷冻
Q1：分选纯度低
A1：
（1）死细胞过多。制备单细胞悬液时，应尽量轻轻研磨样本，避免细胞破损。可用台盼蓝染色判断细胞状态；
（2）红细胞裂解不充分。建议适当增加裂解液使用量或延长裂解时间；
（3）初始细胞量或细胞浓度过高/低。本产品分选细胞数量为1 × 107-2 × 108 cells，进行分选前应使用细胞计数仪或流式细胞仪进行细胞数目测定。试验中细胞浓度应调整为（1 × 108 cells）/ml；
（4）产品组分未充分混匀。Isolation Cocktail 和 Streptavidin Beads添加后应充分吸打混匀，其中Streptavidin Beads组分容易沉降，可以每1 - 2 min应吸打混匀1次；
（5）抗体的使用量或孵育时间不足。应按照说明书推荐抗体使用量和时间进行冰上孵育；
（6）染色异常。建议使用说明书推荐的抗体染色，避光条件下，冰上孵育30 min或室温15 min。
Q2：分选得率低
A2：
（1）计算方式不恰当。得率=（分选后细胞数×分选后目的细胞纯度）/（分选前细胞数×分选前目的细胞纯度）；
（2）Streptavidin Beads孵育时间过长。建议按照说明书推荐时间进行孵育。 Streptavidin Beads孵育时间过长可能会导致非特异性吸附；
（3）分选体积不恰当。按照分选柱建议的上样量，建议细胞浓度为1 × 108 cells/ml；
（4）细胞悬液含有细胞团块。磁珠分选之前应该过滤去除细胞团块；
（5）抗体或磁珠用量超过说明书建议用量。按照说明书推荐的抗体/磁珠用量进行分选。
Q3：分选活性低
A3：
（1）样本制备研磨过于剧烈。制备单细胞悬液时，使用针管的针栓横截面进行研磨，应尽量轻轻研磨样本，避免细胞破损，分选前可以使用台盼蓝染色，确定细胞活性；
（2）分选过程造成机械损伤。分选过程应尽量保持动作轻柔，避免造成过大的机械损伤；
（3）分选时间过长。制备单细胞悬液后，尽快进行细胞分选，时间越长，细胞死亡越多；
（4）分选温度过高。分选细胞收集后需贮藏在适当温度下，一般是保存在4度或者冰上；
（5）细胞裂红体积过大或者时间过长。减少细胞的裂红体积或者裂红时间。
Q4：分选结果存在高背景或非特异染色
A4：
（1）荧光染料孵育时间过长。荧光染料孵育时间可参照说明书推荐的使用时间；
（2）分选buffer成分影响目的抗原。需检查分选buffer成分；
（3）含细胞粘连体或死细胞。在进行活细胞表面染色时，使用活细胞鉴定染料对死细胞设门；使用时确保细胞样本新鲜，细胞尽量都放在冰上操作；
（4）分选buffer不新鲜。使用的分选buffer，请确认分选buffer新鲜并且已经正确制备；
Q5：分选结果无染色或弱染色
A5：
（1）细胞群的设门不正确。对细胞群进行正确的设门；
（2）荧光染料淬灭。荧光抗体及荧光抗体染色后的样本需注意避光保存；
（3）荧光抗体过期或未按照正确温度条件贮藏。需确认抗体储存温度，保质期；
（4）染色细胞数量过多。可以调整细胞群至推荐的密度，如5 × 105 cells添加0.5 μl检测抗体，避光条件下，冰上孵育30 min或室温15 min。
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