miRNA 1st Strand cDNA Synthesis Kit (by stem-loop)
microRNA茎环法逆转录试剂盒
逆转录；miRNA茎环法合成cDNA一链（含gDNA去除）
· 优异的线性关系：在宽广的模板区间内具有良好的线性关系，可检出低至pg 级RNA 模板
· 优越的反应体系：适合的Buffer 组分及浓度，更适用于microRNA 的逆转录
· 简便的引物设计：提供配套的引物设计软件，使得引物设计更加简便
以小鼠肝脏组织Total RNA 的10 倍稀释梯度(10 pg-1 μg) 为模板，使用miRNA 1st Strand cDNA Synthesis Kit (by stem-loop) (Vazyme #MR101) 进行逆转录，得到的cDNA 使用miRNA Universal SYBR qPCR Master Mix (Vazyme #MQ101)扩增mmu-miR-16 基因。结果显示，在宽广的模板区间内，该配套产品具有优异的线性关系。
miRNA 1st Strand cDNA Synthesis Kit (by stem-loop) 是适用于茎环法miRNA cDNA 一链合成的专用试剂盒，含基因组DNA 去除步骤，可以在42℃ 2 min 条件下快速去除基因组DNA 的污染，保证后续结果更加可靠。试剂盒基于的HiScript II Reverse Transcriptase 具有较高的热稳定性，配以针对优化的缓冲体系，均有利于miRNA 特异性逆转录产物的生成。cDNA 产物后续定量，推荐使用本公司的miRNA Universal SYBR qPCR Master Mix (Vazyme # MQ101)，以获得优异的实验结果。同时，配套推出miRNA逆转录茎环引物和定量引物的设计软件，操作简单，为miRNA 实验保驾护航。
-20℃保存。
Q1、采用其他软件设计的茎环逆转录引物及定量引物，能否使用Vazyme #试剂盒（MR101+MQ101）？
A1：可以的。逆转录时可参照说明书直接投入其他软件设计的茎环逆转录引物（2μM浓度），且后续定量实验直接投入相应的定量上下游引物即可。注：若其他软件默认的茎环引物与Vazyme miRNA 引物软件默认的相同，后续搭配MQ101无需合成反向引物，可以使用MQ101自带的mQ Primer R；若茎环引物序列不同，则MQ101提供的mQ Primer R无需使用，需合成正反向引物。
Q2、内参是否需要设计茎环引物及如何逆转录和定量的引物如何使用？
A2：若选择U6等较长的基因作为内参基因，由于序列相对较长，无需设计茎环逆转录引物，直接使用常用的Primer Premier 5等软件设计即可，逆转录时投入内参下游引物（2μM浓度），且后续定量实验直接投入内参的上下游引物即可。如果选择长度较短的miRNA作为内参，需要设计茎环引物进行逆转录，推荐使用Vazyme miRNA 引物设计软件设计逆转录引物和qPCR引物。
Q3、如果要研究多个miRNA定量实验，是不是每个miRNA均要单独设计一条茎环引物进行逆转录？
A3：是的，针对每个miRNA都要设计一条茎环逆转录引物，一管反应中只能逆转一个miRNA（内参也是一样），即不同逆转录引物均需要分管逆转录。
Q4、在逆转录时，多个茎环逆转录引物/内参引物是否可以在同一管中进行？
A4：不推荐。在一管中同时投入多个茎环逆转录引物进行多个miRNA逆转录时，不同特异性茎环引物茎环结构之间会产生相互干扰和影响。
Q5、逆转录体系应该投入多少RNA？
A5：如果提取的是Total RNA，MR101可以兼容10 pg-1 μg的RNA投入量，但是不同miRNA表达丰度不同，建议尽量投入0.5-1 μg RNA。如果提取的是miRNA，逆转投入量参考1/10-1/5 total RNA的量加入，具体还是要根据目标miRNA的丰度来调整。
Q6、miRNA为什么要合成茎环引物？
A6：因为miRNA较短，如果使用普通逆转录和定量方法，无法设计定量引物，需要在逆转录阶段将cDNA延长
Q7：tsRNA如何进行逆转录反应？
A7：tsRNA是一类由tRNA衍生的非编码小RNA，通常长度为18 ~ 40 nt，在维持mRNA稳定性、调节翻译等过程中发挥重要作用。由于tsRNA长度过短，对其进行qPCR定量时，无法直接对tsRNA进行正、反向引物的设计（通常正向引物就足以覆盖tsRNA全长），因此可以使用增加逆转录产物长度的miRNA逆转录试剂盒来解决这一问题，miRNA的逆转录方法有两种，分别是茎环法和加尾法。Vazyme为您提供高特异性的茎环法逆转录产品MR101，及高通量的加尾法逆转录产品MR201均可对tsRNA进行逆转。
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