miRNA Universal SYBR qPCR Master Mix
miRNA染料法定量专用预混液
miRNA基因表达分析；
· 较高的扩增特异性：基于化学法热启动的AceTaq DNA Polymerase，95°C前完全封闭酶活，配以特异性促进因子Exactor，扩增更特异
· 优异的反应体系：合适的Buffer 组分及浓度，更适用于microRNA的qPCR 实验
· 宽广的平台兼容：miRNA Universal SYBR qPCR Master Mix中添加通用型ROX使得mix能够兼容不同平台qPCR仪器，而无需在不同仪器上调整ROX浓度
图1. 较高的扩增特异性
microRNA 序列短，同一家族不同成员序列极其相似，有些仅有单个碱基差别，因此特异性对 microRNA 定量至关重要。miRNA Universal SYBR qPCR Master Mix 以化学法热启动 AceTaq DNA Polymerase 为核心酶，配以优化的Buffer，能够较大限度区分 microRNA 同一家族不同成员间单个碱基的差异，实现高特异性定量。
图2. 优异的扩增灵敏度
以 HeLa细胞Total RNA为模板逆转录，扩增hsa-miR-15、hsa-miR-29、hsa-miR-155、hsa-miR-200基因； 以小鼠肝脏组织Total RNA 样本进行逆转录，扩增 mmu-miR-16、mmu-miR-20、mmu-miR-21 基因。结果显示，与同类产品相比，miRNA 1st Strand cDNA Synthesis Kit (by stem-loop) (Vazyme #MR101) 配 套 miRNA Universal SYBR qPCR Master Mix (Vazyme #MQ101) 的反应体系，均有优异的表现。
图3. 宽广的平台兼容性
使用miRNA Universal SYBR qPCR Master Mix(Vazyme #MQ101) 在不同qPCR 仪上扩增同一基因，在StepOnePlus、QuantStudio 3、CFX Connect 均具有优异的定量结果，说明Vazyme #MQ101 仪器适用性广，无需针对不同仪器调整 ROX 浓度。
本产品是使用SYBR Green I嵌合荧光法进行miRNA定量反应的专用预混液。由于miRNA序列短，且同一家族的miRNA序列往往高度相近，故在定量时对特异性要求较高。本品基于化学法热启动的AceTaq DNA Polymerase，配以优化的Buffer，能够较大地减少非特异性扩增；同时，特殊的ROX Reference Dye，使得预混液适应于所有qPCR仪器，无需在不同的仪器上调整ROX浓度，只需在配制反应体系时加入引物和模板即可进行扩增。
- 20℃避光保存
Q1、采用其他软件设计的茎环逆转录引物及定量引物，能否使用Vazyme #试剂盒（MR101+MQ101）？
A1：可以的。逆转录时可参照说明书直接投入其他软件设计的茎环逆转录引物（2μM浓度），且后续定量实验直接投入相应的定量上下游引物即可。注：若其他软件默认的茎环引物与Vazyme miRNA 引物软件默认的相同，后续搭配MQ101无需合成反向引物，可以使用MQ101自带的mQ Primer R；若茎环引物序列不同，则不能使用MQ101提供的mQ Primer R，需合成正反向引物。
Q2、内参是否需要设计茎环引物及逆转录和定量的引物如何使用？
A2：若选择U6等较长的基因作为内参基因，由于序列相对较长，无需设计茎环逆转录引物，直接使用常用的Primer Premier 5等软件设计即可，逆转录时投入内参下游引物（2μM浓度），且后续定量实验直接投入内参的上下游引物即可。如果选择长度较短的miRNA作为内参，需要设计茎环引物进行逆转录，推荐使用Vazyme miRNA 引物设计软件设计逆转录引物和qPCR引物。
Q3、如果要研究多个miRNA定量实验，是不是每个miRNA均要单独设计一条茎环引物进行逆转录？
A3：是的，针对每个miRNA都要设计一条特异的茎环逆转录引物，一管反应中只能逆转一个miRNA（内参也是一样）。
Q4：在逆转录时，多个茎环逆转录引物/内参引物是否可以在同一管中进行？
A4：不推荐。在一管中同时投入多个茎环逆转录引物同时进行多个miRNA逆转录时，不同特异性茎环引物茎环结构之间会相互干扰和影响。
Q5：逆转录体系应该投入多少RNA？
A5：如果提取的是Total RNA，MR101可以兼容10 pg-1 μg的RNA投入量，但是不同miRNA表达丰度不同，建议尽量投入0.5-1 μg RNA。如果提取的是miRNA，逆转投入量参考1/10-1/5 total RNA的量，具体还是要根据目标miRNA的丰度来调整。
Q6、miRNA为什么要合成茎环引物？
A6：因为miRNA较短，如果使用普通逆转录和定量方法，无法设计定量引物，需要在逆转录阶段将cDNA延长。
Q7：要分别做miRNA 和总RNA，可以先提出来总RNA，再分别逆转总RNA 和miRNA 吗
A7：可以，提出总的RNA 分两份，一份做普通逆转录，一份做miRNA 逆转录（颈环法或者加尾法）。
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