Mouse B Cell Isolation Kit
小鼠B细胞分选
磁分细选，纯净无杂
小鼠B细胞分离纯化
Mouse B Cell Isolation Kit通过阴选方法从小鼠脾脏、淋巴结等组织单细胞悬液中分离出B细胞。其原理是使用Biotin标记的单克隆抗体对非目的细胞进行标记，利用链霉亲和素磁珠去除非目的细胞，从而达到B细胞分选的目的。本产品16 min左右即可获得目的细胞，纯度可高达99%，分选后细胞无异常激活，不影响下游实验。分离过程需搭配磁极或磁力架使用。
图 1 B细胞分选操作流程
纯度高：分选细胞的纯度可高达 99%
活性好：阴性选择，磁珠不与细胞直接接触
速度快：无需分离柱，16 min 即可获得目的细胞
无刺激：磁珠粒径小，分选后细胞无异常激活，不影响下游实验
1.分选纯度高
图 2. 小鼠脾脏分选前后的 B细胞纯度
使用 Vazyme 细胞分选试剂盒进行阴性选择获得的目的细胞纯度可高达99%。
2.细胞活性高、得率高、样本兼容性广
图 3. Vazyme 细胞分选试剂盒分选后细胞活性检测（a）、得率（b）及样本兼容性检测（c）
使用 SYTOX对分选前后的样本进行染色，相对于分选前细胞而言，使用 Vazyme B细胞分选试剂盒分离的细胞，活性基本保持不变（图a）。分选后的细胞具有较高的得率（图b）。此外，Vazyme B细胞分选试剂盒可以兼容脾脏、淋巴结及其混合样本（图c）。
2 ~ 8℃保存，冰袋运输，不可冷冻
Q1：分选纯度低
A1：（1）死细胞过多。制备单细胞悬液时，应尽量轻轻研磨样本，避免细胞破损。可用台盼蓝染色判断细胞状态；
（2）流式检测通道存在问题，根据染色抗体对应的激发和发射波长选择相应的流式检测通道；
（3）初始细胞量或细胞浓度过高/低。本产品分选细胞数量为1 × 107-2 × 108cells，进行分选前应使用细胞计数仪或流式细胞仪进行细胞数目测定。试验中细胞浓度应调整为（1 × 108cells）/ml；
（4）产品组分未充分混匀。Isolation Cocktail 和 Streptavidin Beads添加后应充分吸打混匀，其中Streptavidin Beads组分容易沉降，可以每1 - 2 min应吸打混匀1次；
（5）抗体的使用量或孵育时间不足。应按照说明书推荐抗体使用量和时间进行冰上孵育；
（6）染色异常。建议使用说明书推荐的抗体染色，避光条件下，冰上孵育20~30 min或室温15 min。
Q2：分选得率低
A2：（1）计算方式不恰当。得率=（分选后细胞数×分选后目的细胞纯度）/（分选前细胞数×分选前目的细胞纯度）；
（2）Streptavidin Beads孵育时间过长。建议按照说明书推荐时间进行孵育。 Streptavidin Beads孵育时间过长可能会导致非特异性吸附；
（3）分选体积不恰当。按照分选建议的上样量，建议细胞浓度为1 × 108 cells/ml；
（4）细胞悬液含有细胞团块。磁珠分选之前应该过滤去除细胞团块；
（5）抗体或磁珠用量超过说明书建议用量。按照说明书推荐的抗体/磁珠用量进行分选。
（6）分选时间过长，造成死细胞过多。尽量在冰上操作，避免操作时间过长，分选buffer中需加入EDTA或者DNA酶来避免细胞的黏连；
Q3：分选后细胞活性低
A3：（1）样本制备研磨过于剧烈。制备单细胞悬液时，使用针管的针栓横截面进行研磨，应尽量轻轻研磨样本，避免细胞破损，分选前可以使用台盼蓝染色，确定细胞活性；
（2）分选过程造成机械损伤。分选过程应尽量保持动作轻柔，避免造成过大的机械损伤；
（3）分选时间过长。制备单细胞悬液后，尽快进行细胞分选，时间越长，细胞死亡越多；
（4）分选温度过高。分选细胞收集后需贮藏在适当温度下，一般是保存在4度或者冰上；
（5）细胞裂红体积过大或者时间过长。该试剂盒中含有标记红细胞的抗体，无需再进行红细胞裂解。
Q4：分选结果存在高背景或非特异染色
A4：（1）荧光染料孵育时间过长。荧光染料孵育时间可参照说明书推荐的使用时间；
（2）分选buffer成分影响目的抗原。需检查分选buffer成分；
（3）含细胞粘连体或死细胞。在进行活细胞表面染色时，使用活细胞鉴定染料对死细胞设门；使用时确保细胞样本新鲜，细胞尽量都放在冰上操作；
（4）分选buffer不新鲜。使用的分选buffer，请确认分选buffer新鲜并且已经正确制备。
Q5：分选结果无染色或弱染色
A5：（1）细胞群的设门不正确。对细胞群进行正确的设门；
（2）荧光染料淬灭。荧光抗体及荧光抗体染色后的样本需注意避光保存；
（3）荧光抗体过期或未按照正确温度条件贮藏。需确认抗体储存温度，保质期；
（4）染色细胞数量过多。可以调整细胞群至推荐的密度，如5 × 105 cells添加0.5 μl检测抗体，避光条件下，冰上孵育30 min或室温15 min。
（5）流式检测通道存在问题，根据染色抗体对应的激发和发射波长选择相应的流式检测通道。
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