Single Cell Full Length mRNA-Amplification Kit
第一链cDNA合成， 全长cDNA扩增，产物可用于基因表达差异；融合表达，可变剪切分析
· 模板起始量低：单个细胞或10pg Total RNA即可作为起始模板，进行高效扩增
· 扩增灵敏度高：使用LNA技术及精心优化的反应体系，提高低表达基因的检出量
· 产物完整性好：通过双端引物扩增全长cDNA，获得全转录组信息，避免了5'和3'偏好性
单个293T细胞和10 pg Total RNA分别扩增18个循环，取1 µl纯化后的cDNA扩增产物使用Agilent 2100 Bioanalyzer进行检测，扩增产物分布于400-10000 bp，文库的peak位于2000 bp 左右；无模板阴性对照无产物。
Single Cell Full Length mRNA Amplification Kit能以1-500个细胞或10 pg-10 ng总RNA为模板，以Oligo(dT) VN Primer 为逆转录引物进行cDNA的合成，并且利用逆转录酶Sc Reverse Transcriptase的Template-switching活性在cDNA的3’端添加一段接头序列，通过该接头序列进行后续PCR扩增以获得全长cDNA扩增产物。有效避免了cDNA合成过程中的3’偏好性和rRNA的污染,对获得的全长cDNA扩增产物进行测序分析可以得到基因表达差异、可变剪接、融合基因等遗传调控信息。
Single Cell Full Length mRNA Amplification Kit ，兼容样品体积可控制为2.5 μl。一般情况下，一个反应可以产生2-20 ng的cDNA扩增产物。
Box 1，-70°C储存；
Box 2，-20°C储存。
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Q1：单细胞转录组扩增时，在获得单细胞后不立即进行扩增，细胞该如何保存？
A1：可以将细胞放入裂解液后于-70℃保存一段时间，但是不建议存放时间过长。
Q2： 单细胞转录组扩增出现小片段，可能原因有哪些？
A2：（1）样本出现降解，即取样前细胞已死亡，可尝试重新准备样品；
（2）样本中引入抑制组分，如：胰酶、台盼蓝、高浓度的EDTA、巯基乙醇等。可尝试将细胞在PBS中多清洗重悬几次以解除抑制，或参照3情况解决；
（3）内源性RNA酶过多，在细胞裂解过程中将RNA降解，常见于免疫细胞或一些特殊的组织中。可在加入细胞样本前，在裂解液中加入1%巯基乙醇，用RNA磁珠纯化后再继续进行后续实验。
Q3：RNA样本能否使用N712进行扩增？
A3：RNA进行扩增前，要进行质检。这是因为N711试剂盒只针对带有3’poly(A)的转录本进行扩增。如果RNA质量完整度不好，会丢失5’转录本的信息。如果RNA质量较好，可以使用N711。
Q4：DAPI染色后的活细胞能否用N712 进行转录组扩增？
A4：不同的试剂可能会对后续实验有一定影响。可通过对照实验确定DAPI试剂的影响，或将染色的活细胞在裂解后进行纯化操作。
Q5：单细胞转录组扩增，第一链cDNA合成时，是否需要热盖？
A5：需要，没有特别要求时，默认105°即可。
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