Discover-sc Single Cell WGA Kit
单细胞或微量样本全基因组无差别扩增；全基因组和外显子测序；大片段拷贝数变异分析；微卫星分析；qPCR分析；基因芯片分析
· 样本兼容性广 ：适用于动植物细胞，细菌或者卵裂球，滋养外胚胎层细胞，精子等样本
· 高覆盖度 ：单细胞基因组扩增后可达到95%以上的覆盖度
· 高均一度 ：可用于>1 Mb的染色体拷贝数变异分析
· 高保真度 ：Phi29 DNA聚合酶的保真度是Taq酶的1000倍
· 操作简单 ：单管反应，操作时间少于10 min，扩增产物无需纯化
高均一度
1. 根据分布在人16条染色体上的管家基因设计引物，以人的单个293细胞全基因组扩增产物为模板进行qPCR反应。结果显示，16对qPCR引物都能正常扩增，且检测到的CT值均在22-28之间，表明Vazyme #N603试剂盒扩增均一性好。
图1.qPCR检测结果
2. 使用Vazyme #N603试剂盒对单细胞进行基因组扩增，并使用Vazyme转座酶建库试剂盒（#TD502）构建文库。按照有效浓度及0.01X的测序深度Pooling 后进行Illumina Miniseq测序。下机数据结果显示，reads在基因组各部位分布得比较均匀，表明Vazyme #N603扩增均一性很好，可用于大片段拷贝数变异分析。
图2.全基因组拷贝数散点分布图
高覆盖度
Discover-sc Single Cell WGA Kit使用优化的反应体系，可以实现单细胞的全基因组扩增，且基因组覆盖度可达95%以上，与Q*及Y*公司同类型产品相比，覆盖度更高，性能更优异。
图3.N603与Q*及Y*公司同类型产品，Coverage Rate对比
指数的扩增原理
图4.Phi29 DNA 聚合酶介导的 MDA 示意图
简易的操作流程
图5.操作流程示意图
Discover-sc Single Cell WGA Kit使用基于多重链置换扩增（MDA）的等温扩增体系，启用了定向进化改造的Phi29 DNA聚合酶，具有更高的扩增效率和扩增均一性，能够在2 h内快速实现1-1000个细胞或者微量样本的全基因组无差别扩增。单细胞基因组经N603扩增后可达到95%以上的覆盖度，扩增产物大小在2 - 100 kb之间，平均产物长度大于20 kb，广泛适用于胚胎植入前染色体检测（PGS/PGD）、肿瘤细胞、干细胞、宏基因组学等研究领域。Discover-sc Single Cell WGA Kit中所有酶和缓冲液都经过了严格的质量控制和功能验证，优化的实验体系较大程度上提升了扩增均一性，保证了稳定性和重复性。
| 组分 | N603-01 (24 rxns) | N603-02 (96 rxns) |
| Discover-sc WGA Enzyme Mix | 48 μl | 192 μl |
| Discover-sc WGA Master Buffer | 750 μl | 3 × 1 ml |
| Buffer D | 1 ml | 2 × 1 ml |
| Stop Solution | 1 ml | 2 × 1 ml |
| DTT, 1M | 1 ml | 1 ml |
| Cell Storage Buffer | 1 ml | 2 × 1 ml |
| H2O | 1 ml | 2 × 1 ml |
-30 ~ -15℃保存，如需更长期储存请于-70℃以下存放。
Q1:没有扩增产物：
A1:① 样品在收集过程中丢失： 重新收集样品，确定不会因操作不当，造成样品意外丢失。
② 基因组DNA样本中含有抑制反应的成分： 纯化或者稀释DNA样品。如果样品纯化过程中有乙醇沉淀或漂洗步骤，样品中残留的酒精会抑制反应，纯化过程中要让酒精充分挥发。
③反应温度过高： 反应温度应控制在30℃，过高的温度会使聚合酶失活，如果使用具有热盖功能的PCR仪 进行反应，请将热盖温度设为70℃。
Q2:扩增产生7.5 - 20 μg DNA，但检测到部分染色体错位或等位基因丢失：
A2:①对于以基因组DNA为起始模板的反应： 基因组DNA存在降解。应使用完整的DNA或使用更多量的DNA做为模板。
②对于以细胞作为起始的反应：细胞存在凋亡或者细胞被固定过导致DNA降解；细胞存在难以被裂解的细胞壁(如植物细胞)不适合直接作为起始材料。
Q3:阴性对照有一定的产出，但下游检测结果为阴性(如qPCR)：
A3:无模板的阴性对照反应中，由引物的随机聚合延伸产生的高分子量DNA产物，这种产物不影响目的产物的质量及下游分析。
Q4:阴性对照扩增产生7.5 - 20 μg DNA，且下游检测结果为阳性(如qPCR)：
A4:可能存在交叉污染，由于本反应对微量DNA非常敏感，替换掉所有可能被DNA污染的试剂及用品。
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