Discover-sc Single Cell WGA Kit V2
均一性好，稳定性优的单细胞基因组扩增试剂盒
单细胞或微量样本全基因组无差别扩增；全基因组和外显子测序；qPCR分析；基因芯片分析；胚胎植入前遗传学检测等
Discover-sc Single Cell WGA Kit V2使用基于MDA的等温扩增体系，可以以单个细胞或者微量样本为模板实现全基因组的无差别扩增。单细胞基因组经扩增后可达到95%以上的覆盖度，扩增产物大小在2 - 100 kb之间，平均产物长度大于15 kb，可广泛适用于全基因组和外显子测序、大片段拷贝数变异分析、微卫星分析、qPCR分析、基因芯片分析。
本试剂盒使用的Phi29 DNA聚合酶是从噬菌体中克隆的DNA聚合酶，具有很强的链置换活性，可以实现复杂结构的DNA解链与复制；同时Phi29 DNA聚合酶具有很强的链亲合力，单次聚合反应可以实现长达100 kb的连续聚合延伸，其扩增产物适用于几乎所有的下游应用；与基于PCR的方法相比，Phi29 DNA聚合酶具有很强的3' - 5'的外切酶活性，其保真度是Taq酶的1,000倍，从而保证了DNA合成的高保真性。
- 均一性优：定向进化的Phi29酶，扩增更均一
- 覆盖度高：扩增后可达到95%以上的覆盖度
以PBMC(5-6个)、人gDNA(1 ng)为模板，使用Vazyme #SC101、Vazyme #N603以及其他同类型产品进行扩增，使用Vazyme #TD502对扩增产物进行文库构建。采用PE150测序策略，一共测2G数据量；截取0.5 M reads，以600 kb作为bins，进行PGS流程分析。
下机数据结果显示：Vazyme #SC101的SD值均显著低于N603及其他同类型产品；散点分布图显示，reads在基因组各部位分布得比较均匀，表明Vazyme #SC101扩增均一性好，可用于大片段拷贝数变异分析。
图1 SC101及其他同类型产品的SD_original比对
图2 全基因组拷贝数分布图
-30 ~ -15℃保存，干冰运输。如需更长期则-85 ~ -65℃保存 ，干冰运输。
Q1：扩增产物是否可以进行三代测序？
A1：可以，扩增产物片段平均15kb，可以进行三代测序。
Q2: Phi29酶的孵育时间是否可延长/缩短?
A2: 不建议更改扩增时间，延长或缩短时间会影响扩增均一性。
Q3：阴性对照有一定的产出，但下游检测结果为阴性(如qPCR)：
A3：无模板的阴性对照反应中，由引物的随机聚合延伸产生的DNA产物，这种产物不影响目的产物的质量及下游分析。
Q4: 阴性对照扩增产生7.5 - 20 μg DNA，且下游检测结果为阳性(如qPCR)：
A4: 可能存在交叉污染，由于Phi29酶的高灵敏度，可以对微量DNA进行扩增，建议替换掉所有可能被DNA污染的试剂及用品。
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