Bst DNA Polymerase Large Fragment
等温扩增用酶
· 具有较强的链置换活性
Bst DNA Polymerase Large Fragment 是 Bacillus stearothermophilus DNA聚合酶的一部分， 具有5´→ 3´DNA聚合酶活性，以及较强的链置换 (strand displacement)活性，但缺失5´→ 3´核酸外切酶活性。Bst DNA Polymerase Large Fragment可用于等温扩增反应，例如LAMP (Loop-mediated isothermal amplification), RCA (Rolling-circle amplification)等。
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组 分 |
P701- 01 800 U |
P701- 02 8,000 U |
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Bst DNA Polymerase Large Fragment a (8 U/μl) |
100 μl |
1 ml |
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10 × ThermoPol Buffer b |
1 ml |
3 × 1 ml |
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MgSO4 (100 mM) |
1 ml |
2 × 1 ml |
a. 贮存于10 mM Tris-HCl pH 7.5，50 mM KCl，0.1 mM EDTA，1 mM DTT，0.1% Triton X-100，50% 甘油。
b. 200 mM Tris-HCl pH 8.8，100 mM KCl，100 mM (NH4)2SO4，20 mM MgSO4，1% Triton X-100。
-20℃保存。
Q1：重复性差
A1：使用荧光定量仪器检测；添加甜菜碱；引物可能有问题。
Q2：环介导等温扩增产物可以做酶切鉴定吗
A2：可以。但是开盖容易造成气溶胶污染，一定要谨慎操作。
Q3：LAMP无扩增
A3：建议多设计几组引物，通过预实验选出最佳引物；也可以在反应体系中添加甜菜碱，增强反应的特异性，但浓度过高会造成效率下降，需要摸索合适的浓度，建议25 μl体系中甜菜碱终浓度0.8 M。
Q4：加环引物出现假阳性，不加就正常，是什么原因
A4：若环引物经验证没有污染，则可能是环引物导致了非特异的扩增，这种情况下建议不使用环引物或者更换别的环引物。
Q5：环介导的等温扩增引物如何设计及筛选
A5：环介导的等温扩增引物的设计请参考http://primerexplorer.jp/e/，建议使用V5版本，具体操作手册登录下载。引物的初步筛选可参照操作手册，具体需要通过实验来验证最佳引物。
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