MycoBlue Mycoplasma Detector
一台水浴锅，就可以快速完成支原体的日常检测
各种悬浮、贴壁培养细胞支原体检测；实验室的日常支原体检测
· 简便: 细胞培养上清可直接用于检测
· 快速: 1h通过颜色判定结果
· 兼容：覆盖所有细胞培养常见的支原体
· 准确: 准确性优于PCR法，媲美qPCR法;
图1.随机挑选16个细胞培养物，用三种方法检测支原体，对结果进行比较。
MycoBlue Mycoplasma Detector是针对细胞培养物支原体污染快速检测的试剂，使用简便快捷，只需吸取1 μl细胞培养液上清加入反应体系 中，60℃孵育1 h，肉眼观察即可判定结果。无需 PCR/qPCR 仪，无需电泳，在细胞房内即可轻松完成。与常用的 PCR 法相比，MycoBlue Mycoplasma Detector对培养液上清中的抑制物耐受度更强，因此不会出现弱阳性、假阴性；反应完成后无需开盖电泳，避免了扩增产物气溶 胶造成的假阳性；检测结果与目前灵敏、准确的qPCR 法具有较高的一致性。 经验证，MycoBlue Mycoplasma Detector 可检测多达 28 种支原体，其中包括细胞培养常见的8种支原体；适用于各种悬浮、贴壁培养细胞， 包括CHO、Vero、杂交瘤、Sf9、293等，且具有广泛的培养基兼容性，因此非常适合于生物制药企业、疫苗生产企业、单抗生产企业、细胞治疗 /胚 胎实验室以及科研实验室的日常支原体检测。
-30 ~ -15℃保存，≤0℃运输。
Q1：D101 的灵敏度是多少？如何保证检测灵敏度？
A1：Myco-Blue Mycoplasma Detector 可从1 μl培养上清中准确检出至少500 cfu的支原体，即灵敏度为5×105 cfu/ml。通常情况下，培养上清中的支原体含量在106-108 cfu/ml之间，该试剂可以满足绝大多数实验的需要。据文献报道，单个支原体感染细胞后，在3-5天内可扩增至106 cfu/ml。因此，尽量在换液或传代3天后再进行检测，以使上清中的支原体含量增多，提高检出率。
Q2：加入培养基上清后，反应液即变色；或者反应结束后，反应液颜色呈现紫色与蓝色以外的颜色，是什么原因？如何解决？
A2：（1）原因：在极少数情况下，培养基成分会对Myco-Blue试剂的颜色产生干扰，比如Cell Boost 5 (Hyclone) 会使Myco-Blue试剂呈现出粉红色
（2）处理方法：
- 取少量培养上清或细胞悬液，500 g离心5 min，收集上清；
- 高速离心(>12,000 g) 5 min，使上清中可能存在的支原体沉淀。弃掉大部分上清，保留约50 μl；再加入950 μl无菌水，用移液器吹打混匀；
重复步骤②三次，弃掉大部分上清，保留约50 μl，取1 μl进行检测。
Q3：操作过程中如何避免出现假阳性？
A3：（1）最重要的是反应结束后，不能打开管盖，否则反应产物会产生气溶胶，导致后续检测出现假阳性；
（2）实验结束后将反应管扔到实验室外的垃圾桶内，防止意外开盖；
（3）加样时注意更换枪头，并将阳性对照放在最后一管加入，也可以进一步降低假阳性出现的风险。
Q4：结果全阳性，原因有哪些？
A4：（1）首先考虑加样污染、操作污染。等温扩增十分灵敏，扩增产量很高，形成气溶胶的概率大。因此体系极其容易污染；
（2）每一次检测都必须同时做阴阳对照，如果阴性对照有显色，说明体系被污染了，请注意加样顺序，注意环境中的气溶胶污染和操作过程污染。反应结束后一定不能开盖，请将离心管扔到实验室外，防止在室内垃圾桶中误开盖，导致气溶胶污染；
（3）存放请小心，将盖子盖紧，建议每次使用结束后用封口膜缠紧管盖。
Q5：孵育1小时没显色，多孵育几个小时就显色了，是阴性还是阳性？
A5：（1）HNB显色反应，超过1小时显色不稳定，结果不可信；
（2）请将反应时间控制在60 min，超过60 min的显色反应可信度下降。如果怀疑细胞有支原体污染，可以将细胞传2-3代后重新测定，如果重新测定60 min并未有显色，说明没有支原体污染。
Q6：如果出现支原体污染该如何补救？
A6：若发现细胞存在支原体污染，建议直接丢弃，防止污染其它细胞。同时，复苏一支同批次冻存的细胞进行检测，如果发现是支原体阳性，则将该批次细胞全部丢弃。如果细胞很珍贵，可尝试使用Myco-Off:支原体清除试剂(Vazyme #D103)，对细胞进行挽救。若支原体污染严重，D103 7天不能清除干净，推荐延长处理时间。
Q7：D101可以检测多少种支原体？
A7：MycoBlue Mycoplasma Detector可以准确检出28种支原体：
超过95%以上的细胞是被这8种支原体所污染。
Q8：D101是否可以检测血清支原体污染？
A8：做过测试，血清样本可直接检测支原体污染，显色反应不受干扰。
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