Mycolor One-Step Mycoplasma Detector
给支原体点“颜色”看看！
各种悬浮、贴壁培养细胞支原体检测；支原体污染日常检测
Mycolor One-Step Mycoplasma Detector是一款基于等温扩增技术开发的针对细胞培养物支原体污染的快速检测产品，具有操作简便、结果直观、灵敏度高、特异性强和防污染等优点。本产品将酶与buffer预混，实现一管式检测，只需吸取1 μl细胞培养液上清加入反应预混液中，65℃恒温孵育1 h，通过观察颜色即可判定结果；若细胞培养物存在支原体污染，扩增后反应液会由红色变为黄色，颜色对比明显。同时，试剂中引入了dUTP/UDG防污染系统，避免扩增产物气溶胶造成的假阳性，保证结果准确可靠。本产品可检测40余种支原体，包括8种常见的支原体，适用于各种贴壁、悬浮培养细胞，并对培养基、血清种类具有广泛的兼容性。
图 1 D201检测支原体流程图
防污染：添加防污染系统，有效避免假阳性
简便：酶和buffer为一管式，直接加样，方便快捷
直观：阴性（红色）和阳性（黄色）结果颜色对比鲜明
快速：反应1 h即可通过观察颜色判定结果
图 2 Mycolor One-Step Mycoplasma Detector (D201)检测效果图
使用Vazyme #D201分别检测Hela和Jurkat细胞培养液上清，结果显示，两个样本颜色与阳性对照一致，表明均有支原体污染。
-30 ~ -15℃保存，≤0℃运输。
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Q1：D201的灵敏度是多少（最低检出限）？
A1：可检测低至100 copies/μl的支原体阳性质粒。灵敏度高于传统PCR法，可满足细胞培养日常支原体污染的监测。
Q2：结果呈全阳性，原因有哪些？
A2：环境中的扩增产物污染是导致假阳性的主要原因。如出现假阳性，建议清洁检测环境后用新的检测试剂复测。
Q3：试剂盒里的阳性对照是什么？
A3：阳性对照为含支原体DNA片段的质粒，不会对细胞培养造成污染。
Q4：D201的检测原理是什么？
A4：采用环介导等温扩增(LAMP)技术，当支原体DNA片段被快速大量扩增后，反应管内试剂的颜色由红色变成黄色，即为支原体阳性。
Q5：D201能检测多少种支原体？
A5：D201能准确检测出以下支原体：
Q6：反应液颜色介于红色和黄色之间，是什么原因？
A6：如果颜色介于红色和黄色之间，表明是弱阳性，建议复测，若复测为阳性或弱阳性，则判定为阳性，若复测为阴性，则判定为阴性。
Q7：加入培养基上清后，反应液即变色，是什么原因？
A7：可能培养基中的某些物质会干扰颜色。
处理方法：
1.取少量培养上清或细胞悬液，500 g离心5 min，收集上清；
2.高速离心(>12,000 g) 5 min，使上清中可能存在的支原体沉淀。弃掉大部分上清，保留约50 μl；再加入950 μl PBS，用移液器吹打混匀；
3.再次高速离心收集支原体沉淀，弃掉大部分上清，保留约50 μl，用移液器吹打混匀，取1 μl进行检测。
Q8：如何排查是否是样品的干扰而导致的假阳性？
A8：通过加入荧光染料（Vazyme #RP001）做qPCR验证，观察是否有核酸扩增，若有扩增则说明有支原体污染，反之，则是样品干扰导致的假阳性（可以按照Q7中的解决方案处理）。
Q9：孵育1小时没显色，多孵育一段时间又显色了，如何判断？
A9：不建议孵育时间超过1小时，孵育时间过长有可能导致假阳性。
Q10：检测的环境有要求吗？
A10：对环境无特殊要求，但尽量在专门用于细胞培养或核酸检测的实验室进行检测。
Q11：待测培养液上清可以在-20℃保存几天之后再检测吗？
A11：可以
Q12：如果出现支原体污染，如何补救？
A12：若发现细胞存在支原体污染，建议直接丢弃并小心清洁细胞培养环境，防止污染其它细胞。如细胞珍贵，可使用支原体清除试剂(Vazyme# D103)进行挽救。
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