Nuclear and Cytoplasmic Extraction Kit
核质蛋白提取试剂盒
核质一刀两断，蛋白产量无忧
在新鲜或冻存的动物细胞/组织样本中，依次获得细胞质蛋白和细胞核蛋白
不同蛋白在细胞内发挥功能的场所不同，即亚细胞定位不同，其中核蛋白和胞质蛋白相关研究较多。细胞核蛋白主要参与基因复制、转录调控等生命过程，细胞质蛋白主要涉及物质转运、物质代谢、信号传递等功能。Nuclear and Cytoplasmic Extraction Kit能够从哺乳动物的细胞或组织中逐步分离、制备高纯度的核蛋白和胞质蛋白，整个过程约90 min。提取得到的蛋白可用于Western Blot，EMSA，Footprinting，报告基因检测及酶活力测定等后续操作。
核质蛋白分离效果好，纯度优
新鲜/冻存样本均适用，产量高
1）核质蛋白分离效果好，纯度优
使用Vazyme #E101与同类产品Supplier A，按照各自说明书对细胞/组织样本进行核质蛋白提取，蛋白定量后进行SDS-PAGE凝胶电泳（每孔上样量为10 μg）。结果表明，Vazyme #E101可兼容不同蛋白的提取，同时，获得的核蛋白和胞质蛋白具有更小的交叉污染。
2）新鲜/冻存样本均适用，产量高
Vazyme #E101可以兼容多种新鲜/冻存的细胞/组织样本，且以Supplier A为参考，对提取的核蛋白、胞质蛋白进行同等体积上样，E101提取的核蛋白，其目的条带表达信号更强。
2 ~ 8℃保存，冰袋运输。
Q1：使用E101提取，细胞质和细胞核组分之间会是零交叉污染吗？
A1：使用E101进行提取时，由于样本自身原因（如细胞膜结构）、操作过程等影响，核质组分之间可能存在微弱交叉污染，当细胞质和细胞核之间的交叉污染率在10%左右，其纯度满足大多数涉及细胞核提取物的实验。
Q2：胞质蛋白内有核蛋白污染
A2：（1）加入Cytoplasm Extraction Buffer B后孵育时间过长，部分核膜被裂解，可适当减少孵育时间；
（2）加入Cytoplasm Extraction Buffer B后涡旋剧烈，部分核膜被裂解，可降低涡旋力度，涡旋时间不宜过长。
Q3：核蛋白内有胞质蛋白污染
A3：（1）细胞量过多导致裂解不充分，细胞量与裂解buffer体积要匹配；
（2）细胞团中细胞质膜未被完全破碎，在加入Cytoplasm Extraction Buffer B后延长孵育时间。
Q4:“加入Cytoplasm Extraction Buffer B后孵育4min”，该时长条件兼容所有细胞或者组织吗
A4：不能兼容，不同种类的细胞或组织，其细胞膜结构也不一样，加入Cytoplasm Extraction Buffer B后，细胞质膜/核膜的破裂时间不一样；可以先进行预实验，按照2min、4min、8min的时间梯度进行孵育，通过Western Blot实验检测交叉污染情况。
Q5：提取物内仅含有蛋白吗，是否有其他物质
A5：核质分离的产物是多样的，并非仅限于蛋白，细胞质组分主要包含mRNA、细胞质蛋白、细胞器等；细胞核组分包括核蛋白、核RNA、少量DNA、核仁等。
Q6：E101是否可用于核质分离后的核酸提取
A6：可以，需要注意的是，用于RNA提取时，本试剂非RNase Free，需要另外加RNase抑制剂，且整个提取过程需要在无RNase条件下进行。
Q7：细胞核提取物是否可以用于做CUT-Tag、ATAC-seq等测序分析吗
A7：不可以，CUT-Tag、ATAC-seq等测序分析对细胞核的完整性有严格的要求，E101不能满足。
Q8：E101分离的核质产物在进行蛋白定量时，是否可以用BCA定量法
A8：不可以，E101相关组分可与Cu2+反应，影响检测结果，可使用Detergent Compatible Bradford Protein Quantification Kit (Vazyme #E211)测定蛋白浓度。
Q9：使用E101提取试剂提取核蛋白后，基因组 DNA 位于何处
A9：主要存在于最后离心的沉淀中。
Q10：试剂盒在室温下或-20℃存放了两三天有影响吗
A10：没有影响,但是不能长时间室温放置，也建议不要进行反复多次冻融。
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