BCA Protein Quantification Kit
灵敏型蛋白定量试剂
灵敏型蛋白质浓度定量
操作简单
高灵敏度
兼容性广
线性关系高的标准曲线
图1.使用BSA标准蛋白绘制标准曲线
BCA 蛋白浓度测定试剂盒（BCA Protein Quantification Kit），是目前灵敏度较高的蛋白质测定方法之一。在碱性条件下，蛋白质将Cu2+还原为Cu+，Cu+ 与独特的BCA Reagent A（含有BCA）相互作用产生敏感的颜色反应，形成紫色的络合物。该水溶性的复合物在A562 nm 处显示强烈的吸光性，吸光度和蛋白质浓度在广泛范围内有良好的线性关系，根据吸光值可以推算出蛋白浓度。因此，使用酶标仪测定其在A562 nm 处的吸收值，并与标准曲线对比，即可计算待测蛋白的浓度。
常用浓度的去垢剂SDS，Triton X-100，Tween-20等不影响检测结果， 但受螯合剂(EDTA，EGTA)、还原剂（DTT，巯基乙醇）和脂类的影响。实验中，若发现样品稀释液或裂解液本身背景值较高，可使用Bradford 蛋白浓度测定试剂盒。
BCA Reagent A/B，15 ~ 25℃，室温运输。
BSA Standard，-30 ~ -15℃，≤0℃运输。
Q1：样本浓度不在标曲范围内，该怎么操作？
A1：如果样本浓度太高，需要预先做稀释，最好是通过预实验确定样本稀释范围。
Q2：标曲R2不符合要求是什么原因？
A2：主要是加样量不准确导致的误差，建议校正排枪，注意加样准确度。另外在进行分析时，可以去掉1-2个偏差较大的点，重新计算标曲。
Q3：BCA使用注意事项。
A3：（1）需96孔酶标板，酶标仪一台，测定波长为A562 nm最佳。也可以使用分光光度计测定，但测定时，需根据比色皿的最小检测体积，适当加大BCA工作液的使用量使不小于最小检测体积，样品和标准品的用量可相应按比例放大也可不变。使用分光光度计测定蛋白浓度时， 每个试剂盒可以测定的样品数量可能会显著减少；
（2）长期不用时，Reagent A/B可置于2-8℃保存，如发现细菌污染则应丢弃。Reagent A试剂在低温条件下出现结晶沉淀时，可37℃孵育使 其完全溶解, 不影响使用；
（3）如发现样品稀释液或裂解液本身就有较高背景，请使用诺唯赞生产的Bradford蛋白浓度测定试剂盒；
（4）进行BSA标准蛋白标准曲线绘制时，使用样品蛋白的溶解液溶解BSA最优；
（5）BCA试剂对去污剂不敏感，可兼容SDS 3%、Tween-20 5%、EDTA 15 mM、无EGTA、Triton X-100 5%；对还原剂比较敏感，可兼容 DTT 0.5 mM、β-巯基乙醇 0.07%；
（6）BCA工作液配制过程中吸取Reagent A液和Reagent B液务必更换吸头，工作液新鲜配制后应立即使用，长时间放置会影响检测灵敏度；
（7）最好使用塑料比色皿，如使用玻璃比色皿或石英比色皿，使用后立即用少量95%的乙醇清洗。
（8）为了安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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