Citrate Antigen Retrieval Solution (pH 6.0, 50 ×)
柠檬酸钠型抗原修复液(pH 6.0, 50 ×)
高效修复,让抗原重现生机!
免疫组化抗原修复
细胞或组织样本在经过多聚甲醛、甲醛或其它醛类固定剂处理后,蛋白质间会形成交联结构,使抗原决定簇隐蔽,影响免疫染色效果,甚至出现假阴性染色结果。Citrate Antigen Retrieval Solution (pH 6.0, 50 ×)根据抗原热修复原理,选用柠檬酸钠缓冲液,可以有效去除醛类固定剂导致的蛋白交联结构,暴露抗原表位,更好的改善免疫染色效果。
修复效率高:常规抗原修复后的染色效果好
兼容范围广:适用于多种切片类型和抗原类型
1.修复效率高
Fig.1 不同抗原修复条件下小鼠脑组织中Erk的染色效果对比图(20 ×)
使用Vazyme #HC102和Supplier A 做小鼠脑组织石蜡切片的抗原修复,通过免疫组化实验检测不同一抗稀释度下Erk的染色效果。结果表明,抗原修复能够有效改善抗原的染色效果,在一抗稀释比例1:800时,仍能较好地检测Erk的表达,Vazyme #HC102与Supplier A抗原修复效果基本一致。
2.样本兼容性广
Fig.2 不同抗原修复条件下小鼠心脏组织中Erk的染色效果对比图(20 ×)
Fig.3 不同抗原修复条件下小鼠肠组织中Erk的染色效果对比图(20 ×)
Fig.4 不同抗原修复条件下小鼠肝组织中Akt的染色效果对比图(20 ×)
使用Vazyme #HC102和Supplier A做小鼠不同组织石蜡切片的抗原修复,通过免疫组化实验检测不同一抗的染色效果。结果表明,Vazyme #HC102抗原修复液不受抗原特性的限制,对多种类型的抗原均具有良好的修复效果,经Vazyme #HC102进行抗原修复后,其染色深度与阳性染色范围均与竞品Supplier A基本一致。
2 ~ 8℃保存,冰袋运输。
Q1:抗原修复中导致脱片或组织形态破坏
A1:(1)切片类型是否适用于热修复:冰冻组织切片通常不够牢固,进行抗原修复时会损坏切片。一般会避免使用甲醛固定剂固定冷冻切片(或者在使用时大大减少固定时间),从而省去或减少抗原修复需求。仅在冰冻切片制备中使用了甲醛固定后进行切片的类型可用于热修复(具体需根据切片实际情况决定)。
(2)许多抗原修复存在的问题是组织固定时间过短,强烈的抗原修复可引起形态破坏、脱片。可适当缩短修复时间。
(3)不同的加热方式对切片的破坏程度也不同:压力锅产生的较高温度对于在短时间内有效修复抗原表位反应性是有利的,但较高温度可能破坏或扭曲组织形态;微波炉是一种广泛使用的热修复的加热源,缺点是沸腾的抗原修复液产生的搅拌作用可能导致组织与玻片脱离。
(4)组织切片在抗原修复过程中通常会经历高温处理,如果温度骤降,组织和载玻片之间会产生应力差异。这种应力差异可能导致组织从载玻片上脱落。抗原修复后要求逐步降温,而不是迅速冷却。
(5)使用高质量的载玻片和适当的粘附剂。以及确保切片在修复前完全干燥,例如提前进行烤片。
Q2:抗原信号减弱或丢失
A2:(1)修复条件不适当:温度过高或时间过长,高温或长时间的修复过程可能会导致抗原表位的过度暴露甚至破坏。可适当降低修复温度或缩短修复时间。
(2)修复液pH值不适合特定抗原:柠檬酸盐缓冲液(pH6.0)的优点是染色背景清晰,适合于大多数抗体,一般抗原比较难修复的样本多选择高pH值的修复液。
Q3:非特异性染色增加
A3:(1)抗原修复条件过于激烈,导致非特异性结合增加:过度修复可能会暴露出一些非特异性结合位点,导致抗体与这些位点结合,而不是目标抗原。在实验前可先进行预实验,确定最佳修复条件。
(2)抗原修复液残留在切片上:残留的化学物质可能与抗体或其他染色试剂发生非特异性反应。在抗原修复后,使用适当的缓冲液(如PBS缓冲液)彻底冲洗切片,确保修复液完全被清除。
(3)在抗体孵育前,使用适当的封闭剂(如BSA、脱脂牛奶或专用封闭缓冲液)封闭切片,减少非特异性结合。
Q4:切片脱水
A4:(1)修复过程中切片长时间暴露在高温环境中:避免长时间高温修复,适当缩短修复时间。
(2)修复液体积不足,切片暴露在空气中;确保修复液体积足够,完全覆盖切片。
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