ResiDNA Precise Quantitative E. coli DNA Detection Kit
E. coli残留DNA检测试剂盒
一管式E. coli宿主残留DNA检测试剂盒
生物制品及药品的中间品、半成品和成品中E. coli宿主细胞残留DNA的专用试剂盒
ResiDNA Precise Quantitative E. coli DNA Detection Kit是一款利用探针法定量检测E. coli宿主细胞残留DNA的试剂盒，可用于检测各种生物制品及药品的中间品、半成品和成品中E. coli宿主细胞残留DNA的专用试剂盒，具有特异性强、灵敏度高(可检测fg级)、检测快速、稳定性好及操作便捷等特点。本试剂盒可搭配ResiDNA Hunter Residual DNA Sample Preparation Kit (Vazyme #RD2011/RD2012)使用，用于E. coli宿主细胞残留DNA的微量检测。
结果准确：参考品与国家标准品对齐，试剂盒对E. coli专属性强
稳定灵敏：线性稳定，可检测低至3 fg/μl
简便快速：操作简便，仅需加入样本即可检测，qPCR时间< 1 h
1. 线性范围
试剂盒线性范围为：0.03 pg/μl - 300 pg/μl (SD 5 - SD 1)，R2=1.00，扩增效率=100.10% (每批次试剂盒中的E. coli DNA参考品均采用E. coli DNA国家标准品标定)。具体结果如下：
图1 E. coli qPCR标曲图
2. 定量限
检测0.03 pg/μl，0.015 pg/μl，0.01 pg/μl的E. coli DNA，浓度为0.01 pg/μl及以上浓度复孔的CV值<15%，即E. coli DNA残留检测试剂盒的定量限可达0.01 pg/μl。
表1 定量限结果分析
3. 专属性
测试毕赤酵母、Vero和CHO基因组DNA对E. coli检测试剂的干扰。结果显示干扰组与对照组重合，即在含有高达100 ng背景基因组干扰的情况下，E. coli检测试剂不受影响。
图2 特异性检测结果分析图
4. 优越的扩增线性
优异的扩增线性，与主流品牌相比较高平台值，低浓度样本仍能有高平台。
红色：Vazyme #RD104；蓝色：Supplier A；绿色：Supplier B
图3 不同品牌试剂盒参考品的扩增曲线图
注：E. coli参考品的梯度范围均为30 fg/μl-300 pg/μl
-30 ~ -15℃保存，≤0℃运输。
Q1：扩增效率偏出90% - 110%范围
A1：(1) 如CT(NTC) - CT(SD 6)<3或CT(SD 6) - CT(SD 5)< 3.1，且计算扩增效率超过100%，提示反应体系有污染。绘制标准曲线时，应先根据CT(NTC)确定标准曲线有效CT值范围，舍弃受污染影响的CT，使用剩余的CT绘制；
(2)不恰当的基线(Baseline)设置会增大CT(SD 1)，进而影响扩增效率计算。手动调整基线(Baseline)为1 - 3循环；
(3)移液精度差。
Q2：R2 <0.99
A2：(1) 移液精度差；
(2)所有试剂在使用前应充分解冻并彻底混匀。
Q3：标曲扩增曲线分布不均一
A3：(1) CT (SD 2) - CT (SD 1)<3.1，提示基线(Baseline)设置不当。手动调整基线(Baseline)为1 - 3循环；
(2) SD 1 - SD 6之间的△CT>3.6，提示扩增效率差。确认所有试剂在使用前都已充分解冻并彻底混匀；
(3) 确认所有组分浓度正确以及反应程序无误。
Q4：扩增曲线形状异常
A4：(1) 扩增曲线不光滑：信号太弱，经系统矫正后产生；提高模板浓度重复实验；
(2) 扩增曲线断裂或下滑：模板浓度较高，基线的终点值大于CT值。减小基线终点(CT值 - 4)， 重新分析数据；
(3) 个别扩增曲线突然骤降：反应管内留有气泡。处理样本时要注意离心，进行扩增反应之前要仔细检查反应管内是否有气泡残留。
Q5：复孔重复性差
A5：由于移液偏差造成的结果偏差大，可使用反向移液法，即移液枪的2档吸取，1档排出反应液。
Q6：阴性对照出现明显扩增
A6：反应体系污染：更换新的Mix、Negative Control、引物、探针重复实验。
Q7：绝对定量时标准曲线线性关系不佳
A7：参考品降解：更换新的参考品，重复实验。
