FlysisAmp Cells-to-cDNA Kit
7min轻松获取细胞RNA，27 min直达cDNA
体外细胞药效筛选，细胞RNA表达量检测
FlysisAmp Cells-to-cDNA Kit是一款快速、高效地从"细胞"直接到"cDNA"的试剂盒，适用于从10 - 106个培养细胞中直接制备cDNA。裂解模块可在细胞培养板中直接完成基因组DNA清除和RNA获取，无需经过繁杂的RNA提取流程，用时短，操作简单，出错率低；搭配新升级HiScript IV RT SuperMix合成第一链cDNA，全流程仅需27 min，提高效率的同时也可减少纯化过程中的样品损失。本试剂盒兼容广泛的细胞类型(贴壁或悬浮细胞)及细胞量，还可解决传统提取方式中低细胞数提取效果不佳的问题。本试剂盒可用于高通量(96/384孔细胞板)获取细胞RNA以及合成第一链cDNA。
1. 操作便捷：仅需3步，27 min即可清除gDNA获得一链cDNA
2. 样本兼容性广：可兼容10 - 106个贴壁/悬浮细胞
3. 通量高：兼容不同的细胞培养板(384/96/24/12/6)，可直接在孔板中完成RNA获取
1. 操作便捷：无需传统提取的转管和离心等步骤，可直接在培养板中进行操作，仅需2步，7 - 9 min即可完成细胞gDNA的清除和RNA的裂解，裂解产物直接进行下游逆转录反应，20 min即可获得适用于qPCR的第一链cDNA，全流程快至27 min。
图1. FlysisAmp Cells-to-cDNA Kit操作流程
2. 样本兼容性广：可兼容各种贴壁细胞和悬浮细胞，在10 - 106个细胞投入量下均可稳定扩增；可支持贴壁细胞直接在细胞培养板培养中进行裂解。
图2a. 不同细胞数裂解产物的扩增情况
图2b. 不同细胞培养板培养的细胞所得裂解产物的扩增情况
3.兼容多种下游qPCR试剂：所得cDNA，可用于染料法、探针法qPCR；搭配优异的扩增试剂，形成Cells to CT (Vazyme #CL121/ 122)试剂盒，可获得更优的扩增结果。
图3. CL111下游接染料法、探针法的扩增情况比对
-30 ~ -15℃保存，≤0℃运输。
Q1：后续qPCR或PCR无扩增产物或产量较低
A1：① 细胞裂解不充分：
a. 裂解工作液添加较少：按照说明书推荐的细胞数、孔板数进行反应。
b. 裂解时未将细胞与裂解液工作液混匀：裂解时未将细胞与裂解液工作液混匀：添加裂解工作液时，将吸头伸入液面下加样，添加后直接用移液器吸打8 - 10次混匀。
② Stop Buffer未添加或未混合均匀：添加Stop Buffer时，将吸头伸入液面下加样，添加后直接用移液器吸打8 - 10次混匀。
③ 细胞投入量较少或裂解产物投入量较少：在推荐细胞投入量范围内适当提升细胞投入量或增加裂解产物投入量。
④ 细胞投入量过多，过多的细胞内容物抑制后续的扩增反应：根据推荐细胞投入量进行实验。
⑤ 样本中本身不含有靶标基因或表达量本身较低：提高细胞投入量检测或调整扩增体系。
⑥ 冻存细胞在冻存后使用PBS进行漂洗：冻存后细胞已破裂，PBS洗涤会造成RNA损失；建议重新培养细胞再进行实验。
Q2：RNA降解
A2：① RNA在操作前已降解：新鲜细胞处理后及时放置于冰上，避免长时间在室温放置。
② 裂解产物在室温放置时间过久，导致RNA降解：不要让裂解产物在室温下静置超过20 min，在冰上放置不超过2 h，及时进行后续试验或将裂解产物冻存于-80℃。
③ 细胞投入量过多，内源性RNase降解RNA：减少细胞投入量，根据推荐细胞投入量进行实验。
Q3：基因组DNA残留较多
A3：① 细胞投入量较高：细胞投入量<106个细胞。
② 裂解时间过短：适当延长裂解时间，但不超过10 min。
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