FlysisAmp Cells-to-CT 2-Step Probe Kit
7 min轻松获取细胞RNA，快至62 min获得qPCR结果
体外细胞药效筛选，细胞RNA表达量检测
FlysisAmp Cells-to-CT 2-Step Probe Kit是一款快速、高效地从"细胞"直接到"扩增结果"的全套试剂盒，适用于10 - 106 个培养细胞的基因表达分析。本产品可在细胞培养板中直接完成基因组DNA清除和RNA获取，搭配升级后的HiScript IV RT SuperMix进行第一链cDNA的合成，并用灵敏度高、稳定性强、特异性好的探针法qPCR试剂进行扩增，快至62 min即可从细胞中得到基因表达结果。本试剂盒无需传统提取繁琐的流程，提高效率的同时减少纯化过程中的样品损失；且兼容广泛的细胞类型(贴壁或悬浮细胞)及细胞量，也可解决传统提取方式中低细胞数提取效果差的问题。本试剂盒可用于高通量(96/384孔板)细胞RNA的表达分析。
1. 操作便捷：65 min即可从细胞获得RNA定量结果
2. 样本兼容性广：可兼容10 - 106个贴壁/悬浮细胞
3. 通量高：兼容不同的细胞培养板(384/96/24/12/6)，可直接在孔板中完成RNA获取
4.灵敏度高：搭配全新热启动Taq酶&升级改造的缓冲体系，实现高灵敏检测，有效降低漏检率
1. 操作便捷：无需传统提取的转管和离心等步骤，可直接在培养板中进行操作，仅需2步，7 - 9 min完成细胞gDNA的清除和RNA的裂解，裂解产物直接进行下游逆转录反应，所得第一链cDNA用于基因表达分析检测，全流程快至65 min。
图1.FlysisAmp Cells-to-CT 2-Step Probe Kit操作流程
2. 样本兼容性广&灵敏度高：可兼容各种贴壁细胞和悬浮细胞，在10 - 106个细胞投入量下均可稳定扩增；可支持贴壁细胞直接在细胞培养板培养中进行裂解。
图2a.不同细胞数裂解产物的扩增情况
图2b.不同细胞培养板培养的细胞所得裂解产物的扩增情况
3.裂解产物呈现良好的线性关系：分别裂解10 - 106个，裂解产物的扩增结果呈现良好的线性关系，扩增效率90% - 110%之间，R2>0.99。
图3.10 -106个细胞使用Vazyme #CL121所得裂解产物的扩增情况
-30 ~ -15℃保存，≤0℃运输。
Q1：后续qPCR或PCR无扩增产物或产量较低
A1：① 细胞裂解不充分：
a. 裂解工作液添加较少：按照说明书推荐的细胞数、孔板数进行反应。
b. 裂解时未将细胞与裂解液工作液混匀：裂解时未将细胞与裂解液工作液混匀：添加裂解工作液时，将吸头伸入液面下加样，添加后直接用移液器吸打8 - 10次混匀。
② Stop Buffer未添加或未混合均匀：添加Stop Buffer时，将吸头伸入液面下加样，添加后直接用移液器吸打8 - 10次混匀。
③ 细胞投入量较少或裂解产物投入量较少：在推荐细胞投入量范围内适当提升细胞投入量或增加裂解产物投入量。
④ 细胞投入量过多，过多的细胞内容物抑制后续的扩增反应：根据推荐细胞投入量进行实验。
⑤ 样本中本身不含有靶标基因或表达量本身较低：提高细胞投入量检测或调整扩增体系。
⑥ 冻存细胞在冻存后使用PBS进行漂洗：冻存后细胞已破裂，PBS洗涤会造成RNA损失；建议重新培养细胞再进行实验。
Q2：RNA降解
A2：① RNA在操作前已降解：新鲜细胞处理后及时放置于冰上，避免长时间在室温放置。
② 裂解产物在室温放置时间过久，导致RNA降解：不要让裂解产物在室温下静置超过20 min，在冰上放置不超过2 h，及时进行后续试验或将裂解产物冻存于-80℃。
③ 细胞投入量过多，内源性RNase降解RNA：减少细胞投入量，根据推荐细胞投入量进行实验。
Q3：基因组DNA残留较多
A3：① 细胞投入量较高：细胞投入量<106个细胞。
② 裂解时间过短：适当延长裂解时间，但不超过10 min。
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