RoomTemp Sample Lysis Kit
室温3 min裂解样本的DNA试剂
*规格显示的反应次数以血液样本为基准
全血样本释放DNA；产物可用于SNP检测；qPCR；PCR
操作简捷：室温3 min即可，无需复杂模板提取
裂解效率高：裂解试剂与传统试剂盒提取基因组效果一致
应用广泛：兼容Taqman 探针法的SNP检测，qPCR探针法定量，PCR扩增等
样本兼容广：可裂解新鲜血液、冻存血液、常规抗凝剂血液、组织匀浆、口腔拭子、FTA卡等多种样本
1. 应用衔接—PCR扩增
以常温裂解液（Vazyme #P073），血液基因组提取试剂盒（Vazyme #DC111），PK裂解试剂盒（Vazyme #PD101）及竞品T同时处理的3种抗凝剂全血样本为模板，使用PCR试剂（Vazyme# P222）分别扩增300bp/500bp/1kb/2kb的4个片段，进行琼脂糖凝胶电泳检测。结果显示，常温裂解与试剂盒提取具有同等优异且单一的扩增条带，优于PK裂解和竞品。
图1. 4种方式处理全血样本的PCR扩增结果
2. 应用衔接—qPCR探针法定量
以常温裂解试剂盒（Vazyme #P073）与血液基因组提取试剂盒，PK裂解试剂盒及竞品T同时处理的6个抗凝剂全血样本为模板，使用qPCR试剂（Vazyme #Q811）对3个基因体系进行扩增检测。结果显示，△Ct（试剂盒/PK裂解/竞品 - 常温裂解）≥-0.5，常温裂解具有更优的灵敏度和扩增平台。
图2. 4种方式处理全血样本的∆Ct统计结果
图3. 4种方式处理全血样本的扩增曲线
3. 应用衔接— SNP分型
以常温裂解试剂盒（Vazyme #P073）与血液基因组提取试剂盒，PK裂解试剂盒及竞品T同时处理的18个抗凝剂全血样本为模板，使用qPCR试剂（Vazyme #Q811）对2个SNP位点(rs3787728、rs4947963)进行分型效果检测。结果显示，常温裂解与其他3种方式处理的样本均具有一致的良好分型效果。
图4. 4种方式处理全血样本的SNP分型结果
本试剂盒为简单快速的血液室温裂解试剂盒，仅需室温裂解3 min即可从全血样本中释放基因组DNA，且与传统基因组提取方法效果一致。适用于新鲜血液、冻存血液及常规抗凝剂血液（EDTA、枸橼酸盐、肝素钠等），此外还兼容裂解FTA血卡、口腔拭子、植物组织等多种样本。试剂盒包含有快速破坏细胞膜蛋白及膜结构的特殊组分，可以充分释放细胞内的基因DNA；此外还添加了保护蛋白和稳定因子，可以消除裂解样本中的抑制因子对下游qPCR和PCR反应的抑制作用，使裂解后的DNA溶液得以长期稳定储存。裂解后的DNA溶液可直接作为模板，应用于Taqman探针法的SNP检测，qPCR探针法定量，PCR扩增等。
2 ~ 8℃保存。
Q1：qPCR扩增平台较低或者PCR产量低
A1：可能是由于裂解的样本量较少，或者检测基因的表达量较低。可以尝试增加裂解的样本投入量及扩增体系中模板的投入量。以血液为例，Table 1中推荐的裂解液加入量可裂解2 - 10 μl样本，20 μl扩增体系可兼容1 - 10 μl模板，且对后续qPCR和PCR反应无影响。
Q2：P073裂解鼠尾进行PCR采用的是常温裂解还是95℃加热裂解
A2：采用95℃加热3min的方法。
Q3：P073测试过哪些植物样本
A3：测试过拟南芥的叶片（用打孔器处理叶片）。
Q4：P073的应用领域有哪些
A4：应用领域有动检、SNP分型、宠物医院疾病检测（搭配bst）、直扩、鼠基因型鉴定等。主要客户群体是做诊断的客户。比如，确定一份血液中是否感染了某种病毒；或者精准用药的鉴定，这类客户基本都是探针法来做的。
Q5：裂解血液样本后颜色呈现血红色
A5：一般情况下，血液裂解后的溶液为褐色，但个别血液样本裂解后呈现血红色，与血液样本有关，属于正常现象，对后续实验无影响。
Q6：使用P073是否可以只使用Lysis Buffer进行裂解及后续扩增反应
A6：Stabilizing Buffer中添加了保护蛋白及稳定因子，可以消除裂解样本中的抑制因子对下游qPCR和PCR反应的抑制作用，使裂解后的DNA溶液得以长期稳定储存。如果只用Lysis Buffer进行样本裂解，下游扩增20μl体系中推荐模板投入量为1 - 2μl，裂解后的DNA溶液可于-20℃储存1周，其他情况下不推荐只加入Lysis Buffer裂解。
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