Annexin V-FITC/PI Apoptosis Detection Kit
Annexin V-FITC/PI凋亡检测，可区分早凋和晚凋
贴壁及悬浮培养细胞的凋亡检测；区分存活的早期细胞和坏死或晚期凋亡细胞；细胞凋亡定量检测
· 绿色荧光标记
· 试剂盒中含有PI，可与Annexin V -FITC配合区分早凋/ 晚凋细胞
图 A. 未经喜树碱诱导的Jurkat 细胞，用Annexin V-FITC 和碘化丙啶(PI) 双染后流式二维图（左）与直方图（右）；
图 B. 用终浓度为4 μM 的喜树碱诱导Jurkat 细胞凋亡4 h，用Annexin V-FITC 和碘化丙啶(PI) 双染后流式二维图（左）以及直方图（右）。
在正常细胞中，磷脂酰丝氨酸(PS) 只分布在细胞膜脂质双层的内侧，而在细胞凋亡早期，细胞膜中的磷脂酰丝氨酸(PS) 由脂膜内侧翻向外侧。Annexin V 是一种分子量为35-36 kDa 的Ca2+ 依赖性磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力，因此Annexin V 被公认为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。
将Annexin V 进行绿色荧光(FITC) 标记，以标记了的Annexin V 作为探针，利用流式细胞仪可检测细胞凋亡的发生。碘化丙啶(Propidium Iodide， PI) 是一种核酸染料，它不能透过正常细胞或早期凋亡细胞完整的细胞膜，但对凋亡中晚期的细胞和坏死细胞，PI 能够透过细胞膜而使细胞核染红。因此将 Annexin V 与PI 匹配使用，就可以将处于不同凋亡时期的细胞区分开来。
4-8℃保存，长期不用可将Annexin V-FITC保存在-20℃
Q1：组织样本上流式测定，从收样到上机之间间隔时间过久，如何处理样本？
A1：目前有有三种方法：①将组织放在PBS里面，37度保存。②将组织制备成细胞悬液，4 ℃保存。③制备贴壁细胞，培养8个小时。
这三种方法推荐第二种，制备细胞悬液然后4℃放置应该就可以，因为一般细胞运输就是这样保存的。保存液最好是培养基，会有一些保护作用，提供一定的营养。
Q2：没有早期凋亡。
A2：建议annexin和PI分开染色，提高Annexin V的染色时间，待染色结束后，不用清洗细胞，直接进行PI染色。然后建议做阳性对照，确保操作无问题，并排除由于细胞本身引起的阴性实验结果。
Q3：是否需要进行单染？
A3：需要。
Q4：试剂添加量与其他公司的试剂盒有差异，是否会影响结果？
A4：不会，不同厂家染料浓度不同，所以添加量有差异。
Q5：无法检测到凋亡。
A5：建议先用荧光显微镜观察有无细胞凋亡。实验时，建议annexin和PI分开染色，提高Annexin V的染色时间，待染色结束后，不用清洗细胞，直接进行PI染色。实验时建议添加阳性对照，判断操作是否存在问题。如果是贴壁细胞，需要将上清中的细胞也一起收集。
Q6：假阳性严重。
A6：调整胰酶消化时间，吹打细胞要轻柔，检查一下细胞本身活力。
Q7：怀疑PI染不上晚凋。
A7：100ummol H2O2处理1h，10%细胞早期凋亡；100mmmol H2O2处理1h，90%细胞晚期凋亡。若怀疑PI 存在问题，可以将正常培养的细胞，取一部分拿4%多聚甲醛进行固定，然后PI染色，铺载玻片在显微镜下观察，具体步骤可以参考TUNEL说明书中细胞固定的步骤。
Q8：是否可以做组织的凋亡？
A8：将组织消化城细胞就可以用试剂盒检测凋亡，TUNEL试剂盒也可以用流式细胞仪检测。
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