VEX Exosome Isolation Reagent (from cell culture media)
从细胞培养液上清轻松get外泌体
细胞上清外泌体提取；产物可用于RNA分析；高通量测序；细胞共培养
· 操作简单快捷：无需超高速离心机，一步沉淀
· 兼容低量样本：细胞培养上清可低至1 ml
· 产量稳定可靠：较低的离心力沉淀，获得的外泌体结构更完整，较传统提取方法具有更高产量
HeLa细胞传代培养48 h后，取细胞培养液上清，分别使用R公司、L公司、S公司以及VEX Exosome Isolation Reagent (from cell culture media) (Vazyme #R601) 进行外泌体的提取，后进行NTA分析和Western Blot分析，并用所得外泌体进行RNA提取及miRNA-qPCR检测。
结果可见：VEX Exosome Isolation Reagent (from cell culture media) (Vazyme #R601) 提取得到的颗粒直径峰，峰形更窄，分布更好（图A），产量更高（图B）。与同类产品L 处理后的样本检测结果高度一致，且效率略高于L公司（图C）。Western Blot 显示均能检测到外泌体标志性蛋白CD63（图D）。
本产品是专门用于分离提取细胞培养液上清样本中外泌体的试剂，只需通过简单的低较低速度离心即可从样本中分离出大量外泌体。与传统的超高速离心相比，样本中的外泌体所受到压力较小，可以保持较完整的形态；同时提取过程所需要的时间更短、所需样本起始量更低、提取效率更高。使用本产品获得的外泌体可应用于RNA分析、高通量测序、细胞共培养等多种下游应用。
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组分 |
R601 |
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VEX Exosome Isolation Reagent (from cell culture media) |
50 ml |
4℃保存。
Q1：R601提取的外泌体含量低，应该从那些方面排查问题
A1：（1）首先需要确认之前有没有提取过这个样本的外泌体，得到的产量如何，因为有的样本的外泌体含量本身就是比较少的，建议增加样本的体积；
（2）如果之前提过并且产量正常则按照以下建议：
1. 使用的细胞样本的状态，为了防止FBS中存在较多外泌体或者其他污染物，一般要求细胞在培养到50%-70%左右的时候可以更换无血清的培养基或者不含有外泌体的血清培养基继续培养到汇合度在80-95%的时候收集上清进行外泌体的提取，也可以直接用不含外泌体的血清培养基进行直接培养，后续直接用于外泌体提取；
2. 细胞培养液上清中外泌体的量会受到细胞类型、状态、数目的影响各不相同，都会影响到提取出来的外泌体含量；
3. 用来提取外泌体的细胞上清体积量的多少也会存在影响。
Q2：适用的样本有什么要求
A2：本品适用于各种类型细胞培养液上清中外泌体的提取，为防止FBS 中存在较多的外泌体造成污染，可在细胞培养至50%-70%左右更换无血清培养基或者不含外泌体的血清培养基，培养约12 h后收集上清使用。也可直接使用不含外泌体的血清培养基直接培养细胞，后续直接收集细胞培养液上清进行外泌体提取。
Q3：提取的Exosome 如何应用于下游实验
A3：离心后的沉淀可用100 μl-200 μl 的1 × PBS 重悬后使用，也可使用下一步实验的试剂直接处理沉淀。例如，可直接使用裂解液吹打重悬沉淀后进入RNA 提取流程。
Q4：一次实验需要多少体积培养液
A4：细胞培养液上清中外泌体的量受细胞类型、状态、数目的影响各不相同，根据实验需求决定样本起始量。
Q5：误将该试剂放在-20℃保存了，还能继续使用吗
A5：该试剂应该放在4℃保存，如果误放在了-20℃保存，试剂的性能会有所下降，不建议继续使用。
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