Ultra-Universal TOPO Cloning Kit
兼容高效的拓扑克隆试剂盒
TOPO克隆，TA克隆，平末端克隆；片段保存，片段测序
· 兼容TA克隆和平末端克隆
· 克隆数多
· 阳性率高
本产品操作简便、反应快速，5 min 即可完成连接反应，克隆成功率高。产品采用了第四代拓扑异构酶（Topoisomerase），配合合适的buffer，使酶活性更高；添加二代平末端化因子，可连接高保真酶PCR扩增产物（平末端）与taq酶PCR扩增产物（末端带A碱基）；搭配载体自连抑制因子，防止载体自连，减少假阳性，有效提高了克隆阳性率。本产品可用于目的片段克隆后长期保存及克隆后PCR产物的测序。
1. 克隆数多
测试12个体系，Vazyme #C603平板克隆数均优于同类型产品 Supplier A 和 Supplier B。
2. 阳性率高
连接末端带 A 碱基片段 (2kb、2.7kb) 和平末端片段 (500bp、2kb) 的阳性率为100%。
-30 ~ -15℃保存
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Q1：平板上长不出克隆/克隆很少/空载体
A1：插入片段必须为PCR产物，而不能为酶切产物，而且插入片段引物5’端不能为磷酸化；
A2：平板抗性为氨苄霉素；
A3：如果插入片段回收浓度较低（＜20 ng/µl），需要重新制备插入片段，多管浓缩，以提升插入片段浓度；若插入片段回收浓度过高，需将其稀释以保证添加其体积数≥1 µl；
A4：按照说明书推荐公式对插入片段投入量进行计算，避免小体积（＜1 µl）加入体系中，当计算投入量＜5 ng时，按5 ng投入；
A5：反应建议在PCR仪中进行，推荐连接温度25℃。
Q2：菌液PCR无目的条带
A1：只有空质粒的条带，说明重组不成功，按照Q1排查提高连接效率。
A2：PCR体系或程序不合适：没有目的条带也没有空质粒条带，建议优化PCR体系，程序；或者提取质粒，以质粒为模板进行PCR验证；或者进行酶切验证
A3：PCR试剂不合适：试剂不适合菌液直扩，或者扩增片段太长，超出了试剂的使用范围
Q3：多数克隆含有不正确的插入片段
A1：PCR产物混有非特异性产物：优化PCR体系，提高特异性；胶回收PCR产物；鉴定更多的克隆；
A2：反应体系中混入了相同抗性的质粒：PCR扩增模板为环状质粒时，如扩增产物直接用于重组反应时需进行DpnⅠ消化，或者直接进行胶回收纯化。
Q4：插入片段出现碱基突变
A1：只测试了一个样本，不一定可信，需要多测几个样本；
A2：检查突变处的测序信号是否有问题，若为双峰或者杂峰不一定可信；
A3：如果多个结果突变位点一致，可能是从模板上引入的或者模板序列与NCBI上的不一致；
A4：制备插入片段时推荐使用高保真聚合酶；
A5：若引物处发生碱基突变，可能是引物合成问题，建议重新合成引物进行实验。
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