VAMNE MagUltra Blood Genomic DNA Extraction Kit
磁珠法血液基因组DNA提取试剂盒
血液gDNA快速、高效提取，遇疑难样本更显优势
酶切；PCR；荧光定量PCR；文库构建；Southern杂交等
- 灵活高敏：兼容50μl-1 ml EDTA、枸橼酸钠和肝素钠外周血、脐带血、骨髓血、浓缩血，拭子液，禽类有核血液和细胞等
- 安全无毒：无需酚、氯仿等有机试剂
- 快速便捷：采用磁性吸附，40 min内完成小体积提取
- 量高质优：提取的gDNA产量高、纯度优、完整性好
本试剂盒适用于从50 μl - 1 ml新鲜和冻存的抗凝全血样本中简便快捷地提取基因组DNA。试剂盒基于超顺磁磁性粒子纯化技术和独特的试剂体系，能够有效去除各种杂质而特异地吸附基因组DNA，此过程无需酚氯仿等有机试剂，1 h内即可得到纯度高、质量稳定的基因组DNA，提取产物可直接用于酶切、PCR、荧光定量PCR、文库构建、Southern杂交等下游实验。
1.体系灵活
使用Vazyme #DM101分别提取体积为100、200、500、1000 μl的EDTA冻存全血、反复冻融血和浓缩血，1%凝胶电泳检测提取产物完整性（图1）。结果表明Vazyme #DM101兼容体系灵活且适用于多种血液样本，提取产物无RNA残留和蛋白污染。
图1. 不同EDTA冻存血液样本不同投入体积下gDNA产物凝胶电泳图
2.量高质优
使用Vazyme #DM101与市场上同类产品（Supplier A-D）同时提取200 μl EDTA、枸橼酸钠和肝素钠冻存全血的gDNA，用Qubit测定浓度（图2A），OneDrop测定纯度（图3），1%琼脂糖凝胶电泳检测完整性（图4），qPCR检测提取产物对下游扩增是否有影响（ΔCt值= SupplierA-D的Ct值-DM101的Ct值）（图2B）。结果表明Vazyme #DM101提取产量和Supplier A相当，高于Supplier B-D；纯度均优于Supplier A-D；提取产物无RNA残留和蛋白污染且对下游qPCR扩增无抑制。
图2. 不同抗凝冻存全血gDNA产量和qPCR比对结果
图3. 不同抗凝冻存全血gDNA纯度比对结果
图4. 不同抗凝冻存全血gDNA产物凝胶电泳图
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组分 |
DM101-01 (50 rxns) |
DM101-02 (200 rxns) |
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BOX1 |
MagUltra Beads |
1 ml |
4 ml |
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Proteinase K |
1 ml |
4 ml |
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BOX2 |
Buffer DCL |
20 ml |
80 ml |
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Buffer WA |
33 ml |
2 x 66 ml |
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Buffer WB |
10 ml |
40 ml |
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Elution Buffer |
20 ml |
80 ml |
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Buffer EL |
60 ml |
240 ml |
MagUltra Beads：吸附基因组DNA；Proteinase K：消化样本中的蛋白；Buffer DCL：释放基因组DNA；
Buffer WA：去除DNA中残留的蛋白等杂质；Buffer WB：去除DNA中残留的盐离子；
Elution Buffer：洗脱磁珠上吸附的基因组DNA；Buffer EL：裂解红细胞。
BOX 1，2 ~ 8℃保存，根据不同目的地调整运输方式；
BOX 2，15 ~ 25℃保存，室温运输。
Q1：白血病患者血液、脐带血等细胞含量高的样本及细胞样本的投入量？
A1：建议此类血液投入量在50 - 200 μl之间，细胞投入量<107，且需延长裂解时间(≥15 min)，确保裂解充分。
Q2：裂解和洗脱均在水浴锅中进行，可否更换为边加热边振荡的金属浴？
A2：可以。
Q3：鸡、小鼠、猪等其他动物血液可以提吗？
A3：目前测试过猪血、小鼠、猴子血液和鸡血；禽类和两栖类有核血液建议样本投入量为5-20 μl。
Q4：血液保存时长的要求是什么？
A4：建议-80℃保存时长为一年内，测过保存2年的血液提取效果也是可以的。
Q5：全血可以提取cfDNA吗？
A5：cfDNA提取建议使用血清血浆样本，全血中红细胞破裂释放的核酸酶会降解cfDNA。
Q6：Proteinase K保存不当导致其活性降低或失活？
A6：更换新的Proteinase K进行消化反应。
Q7：样本裂解不充分？
A7：提取时使样本与Proteinase K及Buffer DCL充分混匀，可适当延长65℃水浴裂解时间，增加颠倒混匀次数。
Q8：洗脱液问题？
A8：建议用Elution Buffer洗脱；若用ddH2O或其它洗脱液，确认洗脱液pH值在7.5 - 8.5之间。
Q9：提取产量比正常时相比较低？
A9：加入Elution Buffer后，未将磁珠充分混匀，应适当延长振荡混匀的时间至磁珠充分混匀；或者是晾干时间过长，磁珠出现龟裂现象导致洗脱困难，室内温度过高时，建议缩短晾干时间。
Q10：乙醇残留导致OD260/230偏低？
A10：可用小枪头去除残液，待磁珠晾干（表面无反光）后加入洗脱液。
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