UltraClean Universal Plus DNA Library Prep Kit for MGI V3
针对病原领域的“快”“净”“准”片段化酶建库试剂盒
病原宏基因组测序，mNGS病原检测行业
- 建库时间快——单个文库建库时间短至100 min
- 背景菌干净——严格控制背景核酸
- 病原检出准——准确检出样本病原体
UltraClean Universal Plus DNA Library Prep Kit for MGI V3（UNDM637）是针对MGI高通量测序平台定向开发的超快速酶切法DNA文库构建试剂盒。本试剂盒简化了建库流程、缩短了操作时间，单个文库构建耗时约2 h，且兼具文库转化率高和背景菌干扰低的特性。兼容起始投入量为100 pg - 500 ng，适用于肺泡灌洗液、血细胞、血清、血浆、脑脊液等不同样本类型的DNA，可以更好的应用于病原微生物检测领域等。
1. 文库产出
UNDM637可兼容0.1-500 ng投入量建库，且不同投入量下文库产出均可达到μg级别，高于Supplier A、Supplier B公司同类产品文库产出。
2. 兼容性
由于UND637与UNDM637两款试剂盒除引物外，其余组分完全相同，故兼容性可参考UND637兼容性数据，具体如下：
a：样本兼容性
临床样本（如血浆、脑脊液、肺泡灌洗液等）、PCR产物、cf DNA、cDNA及鲑鱼gDNA等不同类型样本建库后均可成功出库，且文库产出>1 ug。
b：EDTA兼容性
可耐受体系中终浓度为0-3.5 mM的EDTA（下图为300 ng核酸打断纯化后结果）。
|
组分 |
UNDM637-00 |
UNDM637-01 |
UNDM637-02 |
|
FEA Enzyme Mix V3 |
60 μl |
240 μl |
960 μl |
|
Rapid Ligation Buffer V3 |
180 μl |
720 μl |
4 × 720 μl |
|
Rapid DNA Ligase V3 |
30 μl |
120 μl |
480 μl |
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VAHTS HiFi Amplification Mix |
150 μl |
600 μl |
4 × 600 μl |
|
PCR Primer Mix 3 for MGI |
30 μl |
120 μl |
480 μl |
|
Enhancer Buffer |
60 μl |
240 μl |
960 μl |
-30 ~ -15℃保存，≤0℃运输。
Q1：建库后文库产出低，且存在双峰。
A1：系过度扩增所致——PCR反应后期，引物通常会比dNTP先被耗尽。此时，过多的循环会造成扩增产物解链后进行非特异性退火，产生非互补链交叉退火产物。这些产物在依赖电泳的检测方式中迁移速率比较慢，在高分子量区域呈现弥散分布。它们是由正确长度的单链文库构成，在变性后能够与Flow Cell正常结合并被测序。因此，其存在与否对测序而言并无显著影响。然而，因产物不是完整的双链结构，当使用基于识别双链DNA的荧光染料来进行文库定量时，定量结果会比实际值偏低。
Q2：文库存在接头二聚体。
A2：可适当降低接头浓度（接头用量建议按照说明书推荐进行）；同时，接头连接步骤时，注意接头不可与其他试剂预混。
Q3：临床样本（如血浆等）核酸测不出浓度，如何保证成功出库？
A3：对应测不到浓度的样本，可以盲投10-30 ul进行建库，或者掺入0.1-0.5 ng 293gDNA/拟南芥DNA以保证出库。
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