Protein A/G Magnetic Beads
IP/CoIP/ChIP适用，特异性好背景低！
蛋白纯化、蛋白互作
- 特异性好
- 结合效率高
Protein A/G Magnetic Beads是由聚合物磁性微球与高纯度的重组蛋白A/G共价结合而成，磁珠粒径为1 μm，重组蛋白A/G包含蛋白A的5个Fc结合结构域和蛋白G的2个Fc结合结构域，结合能力较蛋白A或蛋白G更强。本产品特异性表面区域更大，抗体结合位点更多，可以大大缩短抗体吸附时间，减少非特异性结合。
1. 特异性好：目的条带单一、背景低
使用Anti-phospho-Akt (Ser473) Rabbit mAb #RA2102免疫沉淀293T细胞的p-Akt蛋白。以Anti-phospho-Akt (Ser473) Rabbit mAb一抗和抗兔空间构象特异性二抗Anti-rabbit IgG for IP (HRP) #RA1008完成Western Blot检测。结果显示PB101特异性优于A公司同类产品。
2. 结合效率高：
使用DYKDDDDK Tag Mouse mAb #RA1003免疫沉淀Flag蛋白。DYKDDDDK Tag Mouse mAb一抗和抗小鼠IgG轻链特异性二抗完成Western Blot检测。结果显示PB101标签抗体结合效率优于A公司同类产品。
2 ~ 8℃保存，根据不同目的地调整运输方式。
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Q1：Input泳道无目的条带，IP组有目的条带
A1：目的蛋白丰度不够Input组检测不到，IP组富集能检测到；提高Input组上样量。
Q2：Input泳道有目的条带，IP无信号或目的条带弱？
A2：(1) 抗体浓度太低，目的蛋白富集少，无法检测到；调整IP抗体浓度。
(2) 抗体亲和力低，一般而言，相比于WB，IP实验需要更高亲和力的抗体。
(3) 增加抗体与磁珠孵育时间。
(4) IP抗体未与磁珠结合；正确保存防止磁珠变质或干燥。
Q3：Input泳道无目的条带，IP无信号？
A3：(1) 样本降解检测不到；冰上操作，裂解样本时，加入蛋白酶抑制剂。
(2) 样本蛋白丰度低，检测不到；提高样本量。
Q4：IP背景高或者出现非特异性信号
A4：(1) 非特异性蛋白与磁珠结合导致背景高；磁珠使用前使用BSA进行预封闭、免疫沉淀后增加漂洗次数和盐离子浓度。
(2) 抗体浓度过高或特异性不好；选用合适抗体类型和使用浓度。
(3) 样本降解可能出现高背景：裂解样本时加入蛋白酶抑制剂或新鲜制备样本；投入合适的样本量，样本过多可导致背景高。
Q5：IP出现轻重链干扰，呈现假阳性或假阴性
A5：普通Anti-IgG(H+L)酶标二抗会同时识别原先的IP抗体（经洗脱变性后断裂为轻链和重链）和WB抗体，导致膜上至少出现三条不同的带，或者轻重链信号过强，导致目的蛋白信号弱，严重干扰实验结果；可使用本公司二抗#RA1009、#RA1008避免轻链和重链的干扰。
Q6：IP/CoIP实验中lgG阴性对照的意义是什么？
A6：排除污染的可能性。例如检测样本中某种目的蛋白，没有lgG对照，而操作过程中有非特异性结合蛋白的作用，就会出现假阳性结果。如果做了lgG阴性对照，对照组没有出现阳性就说明没有非特异性的蛋白；对照出现阳性，说明有非特异性结合杂蛋白的可能，需要重新做实验。
Q7：相互作用蛋白信号弱
A7：(1) 互作蛋白信号弱，表达量低可能检测不到；使用目的蛋白和互作蛋白含量高的样本进行实验。
(2) 目的蛋白识别表位被互作蛋白所遮盖；选择高亲和力的抗体。
(3) 互作蛋白作用弱，在洗涤过程中丢失；实验开始前确定合适的去垢剂和盐离子浓度。
Q8：蛋白未被洗脱下来怎么办？
A8：洗脱条件温和，蛋白未被完全洗脱下来；延长洗脱液孵育时间至15 min，或使用强度更高的洗脱液。
Q9：磁珠聚集怎么办？
A9：(1) 磁珠在缓冲液中储存，应避免干燥造成不可逆的聚集。
(2) 磁珠在低pH洗脱中聚集属于正常现象，不影响下游应用。
(3) 磁珠置于磁场中太久，可能造成磁珠聚集，属于正常现象，涡旋混匀即可。
Q10：磁珠使用过程注意事项
A10：(1) 磁珠使用前先清洗。
(2) 长时间静置，磁珠沉降属于正常现象，涡旋混匀即可。
(3) 磁珠避免剧烈离心。
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