250 kDa Plus Prestained Protein Marker
三色预染，色彩鲜明
Western Blot，蛋白电泳，转膜指示
三色预染
250 kDa Plus Prestained Protein Marker由三种颜色预染的11种不同分子量大小的蛋白质组成，分子量范围为12 - 250 kDa。其中70 kDa为橙红色条带，12 kDa、15 kDa、 20 kDa、35 kDa、40 kDa、55 kDa、100 kDa、130 kDa、250 kDa为蓝色条带，25 kDa为绿色条带。本产品用于SDS-PAGE实验中，可清晰地指示电泳进程，较为准确地判断目标蛋白的分子量；在Western blot实验中，可用于监测PVDF膜 或NC膜的转膜效果以及判断目标蛋白的检测情况；本产品可应用于Tris-Glycine胶和Bis-Tris胶的不同缓冲液体系(Tris-Glycine、MOPS和MES)，本产品的蛋白条带均经非预染蛋白Marker校准，条带大小准确。本品推荐上样量为5 µl。
-30 ~ -15℃保存
Q1：蛋白Marker降解？
A1：(1)由于环境因素或操作不当，致使产品内引入杂质，导致蛋白构象发生变化。请确保实验操作规范。建议将Marker进行分装，避免反复冻融。
(2)模具、凝胶、缓冲液、移液器、移液器吸头或设备在使用过程中可能会被蛋白酶污染。一般建议是避免在同一房间内使用蛋白酶。我们建议准备新鲜的溶液、清洁设备并使用干净的移液器和吸头。
Q2：蛋白Marker是否可以跑磷酸化检测蛋白胶？
A2：不建议，本产品内含有EDTA可能会引起条带弯曲或拖带，如需使用，可加等量金属离子改善。
Q3：蛋白Marker能否跑非变性电泳？
A3：不可以，本产品已变性并还原，仅适用于SDS-PAGE实验。
Q4：蛋白Marker是否能跑预制胶？
A4：可以，本产品兼容多种厂家生产的预制胶以及预混液（Tris-Gly，Bis-tris）。
Q5：蛋白Marker颜色较淡，很模糊？
A5：(1)上样量过低，推荐使用5μL（可适量增加上样量），不可过高，会导致拖尾。
（2）蛋白质上样过多会导致模糊，这个问题在使用银染凝胶时尤为突出。
（3）蛋白胶浓度过低，导致蛋白Marker略微弥散，建议使用高浓度蛋白胶。
Q6：蛋白Marker部分转移不上？
A6：（1）增加电压、电流或转印时间。
（2）凝胶和SDS-蛋白质复合物中的SDS会促进蛋白质从凝胶中洗脱，但抑制蛋白质与膜的结合。这种抑制作用在硝化纤维素膜上的强度大于PVDF膜。对于难以从凝胶中洗脱的蛋白质，如大分子量蛋白质，可在转膜缓冲液中加入少量SDS以改善转印效果。我们建议在组装三明治前将凝胶置于含0.02–0.04% SDS的2x转膜缓冲液（无甲醇）中预平衡10分钟，然后使用含10%甲醇和0.01% SDS的1X转膜缓冲液进行转印。
（3）甲醇可去除SDS-蛋白质复合物中的SDS，促进蛋白质与膜的结合，但对凝胶本身有一些不良影响，会降低转印效率。甲醇可能导致孔径减小、某些蛋白质发生沉淀以及一些碱性蛋白质带正电荷或变为中性。应确保转膜缓冲液的甲醇浓度不高于10–20%，并使用高质量的分析级甲醇。
Q7：蛋白Marker能显影？
A7：蛋白Marker可能与一抗/二抗发生非特异性相互作用。非特异性交叉反应很难预测，它通常具有不同的模式，具体取决于所使用的抗体。如果抗体识别线性表位，则交叉反应可能是由于序列同源性。如果抗体与抗变性构象表位发生反应，则可能无法确定检测到交叉反应的确切原因。
Q8：是否存在任何动物来源的蛋白质？
A8：该产品蛋白均来自于重组原核蛋白，不含有任何动物源性蛋白。
Q9：蛋白Marker没有很好的分离条带？
A9：(1)蛋白Marker被煮沸，丢弃。
(2)上样量过度，建议减少上样量或适量稀释。
Q10：蛋白Marker在Tris-Gly和Bis-tris上迁移率不同？
A10： 预染标准品具有与每种蛋白质共价结合的染料，这将导致标准品在不同的缓冲系统（即不同的凝胶）中迁移率不同。预染蛋白Marker可用于分子量估算、确认凝胶迁移和估算转膜效率，但对于需要更准确地估算分子量的应用，应使用非预染标准品。
Q11：使用的蛋白Marker电泳中发现一些额外的条带？
A11：(1)上样时，请注意确保相邻样品泳道没有交叉污染。
（2）适当减少上样量。
（3）储存不当或反复冻融会导致蛋白质降解。
Q12：为什么预染蛋白Marker不显示真实的条带大小？
A12：发色团与蛋白质的偶联会影响 SDS-PAGE 中蛋白质相对于未染色蛋白Marker表观分子量。预染蛋白Marker的表观分子量与非预染蛋白Marker校准，但预染蛋白Marker在其他电泳缓冲液和凝胶系统中可能具有不同的迁移率。还应注意的是，通过凝胶电泳确定蛋白质的大小并不能给出确切的值，它取决于蛋白质序列和修饰后的大小。
Q13：膜上的蛋白Marker颜色为什么会在1×TBST溶液的洗涤中变浅？
A13：褪色很可能是由于西方封闭/洗涤溶液中的洗涤剂可以从膜上去除一些蛋白质。染料本身不会从蛋白质上洗掉，因为它是共价结合的。我们发现孔径较小的膜在封闭和洗涤过程中能更好地保留蛋白质，因此建议使用 0.2 µm 而不是 0.45 µm 的膜以获得更好地分辨率和蛋白质保留。转移后，可用铅笔在膜上圈出预染条带，以便后续实验中识别。
Q14：发现低分子量蛋白Marker穿过了膜？
A14：(1)减少电压、电流或转印时间。
(2)确保转移缓冲液中的甲醇浓度合适；使用 10-20% 的甲醇浓度 甲醇从 SDS-蛋白质复合物中去除 SDS 并提高蛋白质与膜的结合。
Q15：分子量较小的Marker分不开怎么办？
A15：可能是分离胶浓度低造成的，推荐使用较高浓度的分离胶，有助于小分子条带更加分散，便于观察。
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