Lipomaster 3000 Transfection Reagent
转染性能优异的通用型脂质体转染试剂
高效转染多种细胞类型,包括难转染细胞
高效转染,可高效转染大片段质粒和难转染的细胞
兼容广泛,可用于质粒DNA、mRNA、siRNA等的转染
性质温和,对细胞作用温和,毒性低
Lipomaster 3000 Transfection Reagent是一种由脂质体介导的转染试剂,适用于多种贴壁或悬浮细胞的质粒DNA、RNA转染。Lipomaster 3000 Reagent结构明确,可实现高效、高重复性的细胞转染, T3000 Enhancer Reagent作为转染试剂增强剂可以辅助DNA快速入核,两者搭配使用对大片段质粒和难转染细胞具有较高的转染效率。Lipomaster 3000 Transfection Reagent经过精心设计,使其兼具优异的脂质体/核酸复合物形成能力和转染到细胞内核酸的快速释放能力,保证了优异的转染性能和较低的细胞毒性。
以质粒DNA为例,转染操作流程见图1。
图 1 Lipomaster 3000转染操作流程
1. 细胞兼容性
图 2 Vazyme #TL301与Supplier A、Vazyme #TL201在不同细胞中的转染结果
使用Vazyme #TL301转染单质粒至多种细胞中,均可以实现有效转染,转染效率与同类型进口主流转染试剂一致,优于Vazyme #TL201。
2. 转染效率
图 3 Vazyme #TL301与Supplier A、Vazyme #TL201转染大片段质粒结果图:(a) 单质粒(8.6 kb);(b)单质粒(13 kb);Vazyme #TL301与Supplier A转染RNA结果图:(c)mRNA;(d)siRNA。
Vazyme #TL301在转染大片段质粒(8.6 kb和13 kb)时效率与同类型进口主流转染试剂Supplier A一致,优于Vazyme #TL201。Vazyme #TL301在转染mRNA和siRNA时,效率与Supplier A一致。
2 ~ 8℃保存,不可冷冻
Q1:Lipomaster 3000可以做多质粒共转吗?
A1:可以。质粒的总投入量参考说明书推荐量添加,各个质粒的投入量需要根据实验目的进行调整。
Q2:Lipomaster 3000可以兼容siRNA与质粒共转吗?
A2:可以。质粒和siRNA的量可以参考说明书中的推荐量添加,T3000 Enhancer Reagent的量只需依据质粒的量添加。
Q3:转染效率偏低
A3:① Lipomaster 3000与DNA的比例不合适,首次实验需要设置梯度摸索合适比例;
② Lipomaster 3000原液或/和DNA原液未经无血清培养基稀释直接混合;
③ 加样顺序,应将稀释后的DNA滴加至稀释后的Lipomaster3000中;
④ 转染时细胞密度不合适,细胞密度建议在70%-90%;
⑤ DNA质量偏低,应使用高纯度、无菌、无内毒素的质粒DNA;
⑥ 细胞状态偏差(细胞活力低、传代次数过多、复苏后未传代、有支原体污染等)。
Q4:转染后细胞状态差
A4:① 转染后细胞培养时间过长;
② 转染时细胞密度不合适;
③ Lipomaster 3000/DNA过量,可以适当减少转染试剂的量;
④ 转染复合物加入培养基时分布不均匀,造成局部毒性大;
⑤ 细胞状态本身偏差(如支原体污染)。
对于一些敏感细胞,可以在转染前换液,或转然后6-12 h更换新鲜培养基。
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