Ni Elite Beads (TED)
化学耐受载量高，填满蛋白纯化“芯”
His - Tag蛋白纯化
Ni Elite Beads (TED)以高度交联的6%琼脂糖凝胶为基质，通过化学方法偶联羧甲基乙二胺(TED)为配体，螯合镍离子后，形成稳定的八面体结构。与IDA、NTA等其它类型Ni填料相比，Ni Elite Beads (TED)具有更强的兼容性，对EDTA、NaOH、DTT等具有很强的耐受性，可以直接用NaOH溶液对填料进行清洗而无需反复再生。该产品可以用于大规模蛋白的纯化，可在相对较高的流速下，实现His - tag蛋白的纯化。
- 化学耐受性强
- 无需剥镍再生
- 动态载量高
- 兼容性强
- 填料寿命长
1. 化学耐受性强，无需剥镍再生
HP201纯化含5 mM或10 mM EDTA/DTT的样品，目的蛋白的纯度和回收率无显著变化，与竞品supplier A相当。综合比较，HP201耐受10 mM EDTA/DTT，且性能不受影响。
2. 动态载量高（每毫升填料结合His - tag蛋白的能力）
在相同条件下，用某60 kDa重组蛋白的原核细胞裂解上清进行载量测试，HP201动态载量高达50 mg/ml以上，高于竞品Supplier A，表明HP201的动态载量更高。
3. 兼容性强
图中展示了HP201对不同分子量、不同来源（原核、哺乳动物细胞和酵母细胞）、不同类型（可溶上清和包涵体）样品的纯化效果。以竞品Supplier A为对照，HP201可以兼容不同类型的表达系统和大分子蛋白的纯化，纯化效果≥竞品Supplier A，同时兼容可溶上清和包涵体样品，有着较好的样品兼容性。
4. 填料寿命长
为了测试HP201的重复使用性能，在同一柱上连续进行了20次运行。左图为前14次运行的洗脱样品SDS - PAGE胶图，表现出非常好的重复性；右图为16 - 20次运行的洗杂和洗脱样品的SDS - PAGE胶图，洗杂步骤的去杂效果未见明显下降，洗杂和洗脱效果表明HP201具有较好的重复性。
2 ~ 8℃保存在20%乙醇中，根据不同目的地调整运输方式，不可冻存。
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Q1：洗脱组分中没有目的蛋白
A1：建议对诱导蛋白表达前的菌液/细胞上清液、诱导蛋白表达后的菌液/细胞上清液、裂解液、流穿液、洗杂组分进行SDS-PAGE验证：
(1)流穿液中含有大量目的蛋白：可能是由于His标签没有充分暴露，可在蛋白中加入适量的尿素或盐酸胍等变性剂，或者考虑更换标签位置 ；适当提高缓冲液pH、降低咪唑浓度、调整缓冲液中盐离子浓度或者更换缓冲液都可能会提高His标签蛋白的挂柱能力。
(2)诱导蛋白表达后的菌液/细胞上清液无目的蛋白：表达量过低，富集的蛋白太少未能检测到，可优化表达条件，提高表达量。
(3)目的蛋白在洗杂组分中：目的蛋白结合较弱，可降低洗杂液中咪唑浓度或提高洗杂液的pH。
(4)诱导蛋白成功表达，流穿液、洗杂组分、洗脱组分均无目的蛋白：目的蛋白结合过强，不易洗脱，增加洗脱液中的咪唑浓度，或降低洗脱液的pH；蛋白易降解，在样品中添加适量的蛋白酶抑制剂，如1 mM PMSF。
Q2：产品被放进-20℃冻住了，有变干迹象，解冻了还能用吗?
A2：(1)变干迹象可能是由于20%乙醇被冻住，导致柱内液面低于凝胶表面，水分蒸发。
(2)重新用ddH2O排尽柱子内的气泡并不影响产品性能，-20℃能稳定存放3天。建议按说明书储存，琼脂糖在低温环境可能裂开影响实验性能。
Q3：实验室中洗杂、洗脱的咪唑浓度与说明书不一致？
A3：不同蛋白对咪唑浓度的要求不同，具体浓度可根据不同蛋白进行优化，以达到较优的洗脱效果。
Q4：产品说明书建议的是磷酸盐缓冲液，可以使用别的缓冲液吗？
A4：缓冲液除了磷酸盐缓冲液，还可使用Tris缓冲液、甘氨酸缓冲液等。
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