VeZol-Pure Total RNA Isolation Kit
量高质优,稳定提取总RNA
RNA提取,产物可用于RT-PCR、qRT-PCR、Northern Blot、Dot Blot、体外翻译和高通量测序等分子生物学实验
VeZol-Pure Total RNA Isolation Kit适用于从多种培养细胞、动植物组织等样本中分离出高质量的Total RNA。本产品用VeZol Reagent充分裂解样本,通过硅胶膜特异吸附水相中的RNA,兼具Trizol法裂解能力强、兼容性广、产量高和柱式提取法快速、纯度高的优点。获得的Total RNA可以直接用于RT-PCR、qRT-PCR、Northern Blot、Dot Blot、体外翻译和高通量测序等分子生物学实验。
高产高纯:高产量高纯度集于一身
快速简便:20 min,全程同一温度离心
兼容广泛:适用于动物组织、培养细胞、植物等样本
1.样本适用范围广
使用Vazyme #RC202对不同动物组织、培养细胞、普通植物和新鲜全血样本进行RNA提取,并对产物进行琼脂糖凝胶电泳检测(图1),结果显示Vazyme #RC202对多种类型的样本均具有广泛的兼容性。
图1. 不同样本提取产物电泳图
2.RNA产量高、纯度佳
使用Vazyme #RC202与市场上同类产品Supplier A、B、C、D,按照各自说明书同时提取30 mg大鼠肝脏、1×106 Cells A549细胞、50 mg水稻叶片的总 RNA,并进行浓度测定和琼脂糖凝胶电泳检测。结果表明,Vazyme #RC202 提取的RNA产量、纯度和完整性均较好(图2, 3)。
图2. 不同产品RNA产量和完整度比对结果
图3. 不同产品RNA纯度比对结果
BOX 1,2 ~ 8℃避光保存,室温运输; BOX 2,15 ~ 25℃保存,室温运输。
Q1:如何保存组织样本?
A:如果不能立刻提取RNA,应将组织离体后迅速投入液氮冷冻,并用液氮保存;或液氮速冻后,转移至-85 ~ -65℃保存。不能直接将新鲜组织放在-85 ~ -65℃冷冻,因为样品的冻结是一个缓慢的过程,在这个过程中内源RNase会将RNA降解。此外,针对不具备液氮速冻条件的情况,可将新鲜组织充分浸泡在RNA Keeper Tissue Stabilizer (Vazyme #R501)中,在室温可存放一周,2 ~8℃存放一个月,或在-30 ~ -15℃/-85 ~ -65℃长期保存。
Q2:出现污染?
A:① 蛋白质污染。采用分光光度计检测提取产物OD260/OD280偏低时,提示可能存在蛋白质污染。遇到此种情况,需要考虑是否组织投入量过大,导致裂解不充分,可以适当增加VeZol Reagent或者降低组织投入量进行提取。② 脂肪污染。处理脂肪含量丰富的组织时,加入VeZol Reagent后,可11,200 rpm(12,000 × g) 4℃离心5 min,去除上层油脂,然后将透明上清转移至新的RNase-free离心管中,再进行下一步操作。③ 基因组污染。建议减少样本起始投入量,吸取上清溶液时注意不要吸到下层有机相,部分植物样本在使用辅助剂时会出现基因组残留。
Q3:RC202针对RNA含量低的样本如何提高产量?
A:可以适当延长裂解时间,保证样本裂解充分,或提高醇量,将0.5倍无水乙醇提高到1倍无水乙醇上柱。
Q4:RC202 RNA洗脱体积最少投入量?
A:说明书建议洗脱体积为50-200 μl,若样本RNA含量低,可适当降低洗脱体积,建议不少于20 μl。
Q5:RC202 是否可以常温操作?
A:RC202裂解和加氯仿离心萃取步骤一定要4℃离心外,其余步骤均可选择室温操作。
Q6:RC202提取血液样本注意事项?
A:目前血液样本建议提取新鲜血液样本,建议0.1 ml样本使用0.9 ml裂解液。投入量过大,可能导致蛋白和基因组残留。
Q7:RC202 可以在哪些步骤暂停保存?
A:样本加入VeZol Reagent或加氯仿后:在-80℃、-20℃可保存一个月,4℃可保存两周;取上清后:在-80℃、-20℃、4℃可保存一个月。
Q8:RC202 可以提病毒吗?
A:可以。