Annexin V-APC/PI Apoptosis Detection Kit
分群更清晰，轻松做凋亡
贴壁及悬浮培养细胞的凋亡检测；区分正常、早凋和晚凋细胞；细胞凋亡定量检测
Annexin V是一种35 - 36 kDa的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，与PS具有高度亲和力。将Annexin V以荧光染料APC进行标记，标记后的Annexin V保留了与PS的高亲和力，利用流式细胞仪或荧光显微镜可进行早期凋亡细胞的检测。碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)是一种核酸染料，PI不能透过正常细胞或早期凋亡细胞的完整细胞膜，但可穿透膜损伤细胞如晚期凋亡细胞或者坏死细胞的细胞膜并与细胞核内的DNA结合。因此将Annexin V-APC与PI进行共染，就可以区分不同凋亡时期的细胞。
1、分群清晰：准确区分早凋/晚凋，分群更明显
2、适用广泛：GFP荧光不干扰，贴壁/悬浮细胞都适用
3、操作简便：15-20 min即可完成染色
用56℃高温诱导293T-eGFP细胞（人胚肾细胞）凋亡，使用Vazyme #A214及Supplier A凋亡试剂盒检测细胞凋亡状况，用流式细胞仪检测结果如图1：(A)阴性对照-双染组，(B)阳性对照-APC单染组，(C)阳性对照-PI单染组，(D)双染组。结果显示，Vazyme #A214检测带有绿色荧光的细胞可实现有效分群，无串色干扰，凋亡检测效率高于Supplier A。
图 1 293T-eGFP细胞凋亡检测结果图
用终浓度为40 μM 的喜树碱（Camptothecin，CPT）诱导Jurkat 细胞 (人T淋巴瘤细胞) 凋亡4 h，使用Vazyme #A214及Supplier A凋亡试剂盒检测细胞凋亡状况，用流式细胞仪检测结果如图2：(A)阴性对照-双染组，(B)阳性对照-APC单染组，(C)阳性对照-PI单染组，(D)双染组。结果显示，在细胞分群方面，Vazyme #A214>Supplier A，两种检测试剂盒均无串色现象，Vazyme #A214早凋率和晚凋率高于Supplier A。
图 2 Jurkat细胞凋亡检测结果图
本试剂盒所有组分均在2 - 8℃保存，Annexin V-APC和PI Staining Solution需避光保存，勿冷冻。
Q1： Annexin V-APC染色失败或者阳性率偏低
A1：
1. 需确定实验中使用的诱导剂是否能使细胞产生凋亡，可通过56℃高温诱导细胞10 min作为阳性对照。
2. 贴壁细胞药物诱导后漂浮的细胞也要收集，这部分细胞往往是凋亡阳性的细胞，丢弃会造成阳性结果偏低。
3. 一些细胞其细胞膜上PS的密度较低，染色效果很差，此时建议更换细胞株或者采用TUNEL法检测凋亡。
Q2：假阳性
A2 :
1. 细胞本身活力低。建议用台盼蓝染色计算细胞活力，阴性对照台盼蓝拒染的细胞应大于95%。
2. 操作过程中吹打细胞过于剧烈或贴壁细胞消化时间过长，均可能导致细胞膜破坏，出现假阳性。
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