Ribo-clean rRNA Depletion Kit Mega (Prevalent Species)
高频物种(人、大鼠、小鼠、食蟹猴等)总RNA中去除rRNA，mRNA和非编码RNA分析
Ribo-clean rRNA Depletion Kit Mega (Prevalent Species)是针对高频物种(人、大鼠、小鼠、食蟹猴等)总RNA中去除rRNA的试剂盒。本试剂盒适用于起始模板量为0.01 - 1 μg的总RNA，总RNA样本经过rRNA与探针杂交、RNase H消化、DNase I消化等步骤，最终将rRNA(包括5S、5.8S、18S、28S rRNA，12S、16S rRNA，45S rRNA)从总RNA中去除，保留mRNA以及其它非编码RNA；该试剂盒同时适用于完整的和部分降解的RNA样本，得到的RNA可用于mRNA和非编码RNA(例如IncRNA)分析。优化的反应体系提高了去除效果和物种兼容性。
更多物种：兼容人、小鼠、大鼠、仓鼠、食蟹猴等高频物种
更少残留：rRNA去除效率＞99%
更短时间：操作流程仅1 h
1 μg的293、大鼠、小鼠RNA样本，使用升级产品RN416与Supplier A分别进行rRNA去除，而后衔接NR616构建链特异性文库，文库进行Illumina测序（PE150），通过分析测序数据rRNA Ratio、mRNA Ratio、基因表达量、Mapping Ratio等指标，比较相同建库条件下两产品去除性能情况。结果显示：使用RN416 rRNA去除，所有指标均显著提升！
图1. RN416物种兼容性测序数据展示
-30 ~ -15℃保存，≤0℃运输。
Q1：若需要对多类物种进行rRNA去除，是否可以同时使用多种探针？
A1：可同时混用多种探针对多类物种进行rRNA去除。可以根据说明书推荐的探针使用量进行实验，减少RNA投入体积。
Q2：如何查询目标物种适应产品以及产品中的物种覆盖度？
A2：可在网站http://cloud.vazyme.com:83/application-tool中查阅各产品物种覆盖度。覆盖度不等于去除效果，仅供参考。
Q3：纯化产物如何保存？
A3：纯化产物由于浓度较低容易降解，去除rRNA的样品应尽快进行下游实验，否则于-80 ~ -65℃保存。
Q4：如果纯化产物用于文库构建，但是使用的是Nuclease-free ddH2O洗脱，如何操作?
A4：使用VAHTS Universal V10 RNA-seq Library Prep Kit for Illunima(Vazyme #NR606)时，若条件允许，加入等体积的VAHTS 2 × Frag/Prime Buffer V2 (Vazyme #N405)，之后反应体系均放大，直至做到纯化步骤，恢复体系；也可以再次使用VAHTS RNA Clean Beads(Vazyme #N412)进行纯化，最后用Frag/Prime Buffer洗脱。
Q5：如果起始文库浓度过低，可以从哪些角度去寻找原因并改进？
A5：rRNA去除后RNA的产量取决于起始RNA的质量、样品中rRNA的含量及使用的纯化方法。以高质量的RNA样品为模板构建得到的文库浓度均能达到上机测序要求，如果无法提取合格的RNA样品，可以尝试使用以下方法弥补：
1.起始量：提高样品起始量，上限1 μg。
2.做几个重复的样品，纯化步骤后合并在一起。
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