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T7 Endonuclease I
T7 核酸内切酶I
基因编辑后突变体的检测
· 高检测灵敏度高
· 产物可直接电泳检测
T7 Endonuclease I 是克隆重组T7 Endonuclease I基因后在大肠杆菌中表达纯化的高活性蛋白，能识别并切割不完全配对DNA、十字型结构DNA、Holliday结构或DNA 分叉点、异源双链DNA 及低速切割带切刻位点的双链DNA。酶切位点为错配5’ 端的第一、第二或第三个磷酸二酯键。
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组分 |
EN303-01(250 U) |
EN303-02(1,250 U) |
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T7 Endonuclease I |
25 μl |
125 μl |
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T7 Endonuclease I Reaction Buffer(10 x ) |
1 ml |
1 ml |
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Control template |
10 μl |
20 μl |
-20℃保存
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Q1：做基因编辑，酶切验证编辑成功，但是测序结果却不正确（假阳性）。
A1：编辑完成之后，提取基因组，做PCR扩增目的片段，利用T7核酸内切酶进行验证，有目的条带，连T载做转化，菌检测序。建议在菌检结束之后，利用菌检产物再做一次酶切验证是否将有效片段连入载体，如果酶切验证是阳性的，则可以测序。
Q2：该实验反应温度的上限是多少？
A2: 反应温度超过42℃时，会增加非特异性核酸酶活性。避免反应温度超过55℃，否则会导致酶活性降低。
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