VAMNE Magnetic Pathogen DNA/RNA Kit
一举两得，磁珠法病原微生物DNA/RNA共提试剂盒
DNA/RNA共提取；产物可用于PCR；qPCR；宏基因组文库构建；DNA/RNA共建库
· 兼容：兼容血液、拭子、痰液、肺泡灌洗液等生物液体样本和菌液样本
· 快速：单样本提取时长仅需44 min
· 高效：高效裂解难破壁微生物，提高微生物检出
· 共提取：可同时提取病原微生物的DNA/RNA
本试剂盒适用于从生物液体样本（肺泡灌洗液、血液、痰液、脑脊液、拭子液等）和微生物培养物样本中分离纯化DNA和RNA。试剂盒采用化学法与机械法相结合的裂解方法，能够高效裂解细胞壁较厚的细菌或真菌类样本。试剂盒中的高亲和力硅基磁珠在高盐缓冲液作用下，通过氢键和静电吸附核酸，经过漂洗去除多余的蛋白质和盐；在低盐洗脱液或Nuclease-free ddH2O作用下，磁珠释放核酸，从而达到快速分离纯化核酸的目的。本试剂盒提取过程安全无毒、操作便捷，无需使用酚氯仿等有毒试剂，在保障核酸提取效率的同时较大限度地去除蛋白质、无机盐及其他杂质。分离的DNA和RNA适用于PCR、Real-Time PCR、宏基因组文库构建、DNA/RNA共建库等多种下游应用。
1. 快速
图1. RM601操作流程概要
2. 兼容
将低起始量的大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、毕赤酵母和PRV（DNA病毒）疫苗稀释液、 PRRSV（RNA病毒）疫苗稀释液添加至肺泡灌洗液、口腔拭子、痰液等样本中，参照Vazyme #RM601和Supplier A同类产品提取流程进行提取，使用qPCR法对提取得到的微生物核酸进行定量，检测的平均Ct值越低，表示检出率越高。结果表明：Vazyme #RM601对不同样本中不同微生物的提取效率优于Supplier A（图2）。
图2. 提取产物qPCR定量结果
3. 高检出
在100 μl人全血中掺入103的大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、鼠伤寒沙门氏菌、枯草芽孢杆菌等多种病原微生物，参照Vazyme #RM601和Supplier B同类产品提取流程进行提取，提取产物使用Vazyme #ND617进行文库构建，经质控合格的文库使用Illumina HiSeq X10平台进行PE150测序。结果表明：Vazyme #RM601对不同种类病原微生物的提取效率优于Supplier B同类产品（图3）。
图3. 不同病原微生物检出Reads数
Proteinase K，2 ~ 8℃保存，根据不同目的地调整运输方式；
其他组分，15 ~ 25℃保存，室温运输。
|
常见问题 |
原因 |
解决方案 |
|
痰液样本 加样不准确
|
痰液样本粘稠，难以准确加样
|
1. 若样本为白色泡沫状稀痰，取相应体积的痰液，向其中加入5倍体积的N-乙酰半胱氨酸溶液(10 g/L)，振荡混匀液化30 - 60 min后进行提取 2. 若样本为白色、黄白色粘痰或黄色伴血丝痰、血痰，取相应体积的痰液，向其中加入10倍体积的N-乙酰半胱氨酸溶液(10 g/L)，振荡液化30 - 60 min后进行提取 |
|
病毒样本 检出低
|
取出上清时裂解产物损失 |
若关注度偏向于病毒检出，可省略Lysis Tube 2裂解步骤，按照如下步骤操作： 1. 向2 ml Nuclease-free Tube中依次加入400 μl样本、40 µl Proteinase K、200 µl Lysis Buffer 2、200 µl Binding Buffer 2，涡旋混匀。 2. 选择08-2步骤2相应裂解方法进行操作。 3. 将2 ml Nuclease-free Tube置于56 ℃水浴10 min，瞬时离心，向离心管中加入490 μl异丙醇。 4. 按照08-2步骤5-11继续操作。 |
|
核酸产量低 |
细胞壁破碎不完全 |
适当增加机械裂解时间，充分破壁 |
|
洗脱效率低 |
将Nuclease-free ddH2O预热至56 ℃后再进行产物洗脱 |
|
|
Wash Buffer A/Wash Buffer B 未添加无水乙醇 |
1. 请向剩余Wash Buffer A中加入1.35倍体积的无水乙醇 2. 请向剩余Wash Buffer B中加入4倍体积的无水乙醇 |
|
|
核酸纯度低 |
杂蛋白污染 |
增加1次Wash Buffer A漂洗步骤 |
|
杂质离子污染 |
增加1次Wash Buffer B漂洗步骤 |
相关产品
VAHTS Universal Plus DNA Library Prep Kit for MGI
NDM617-01/02
N411-01/02/03
