FastPure EndoFree Plasmid Mini Kit
高产无内毒，25 min转染级质粒小提
质粒DNA提取；产物可用于酶切；PCR；测序；连接转化；转染
· 产量高：提取效率高，质粒DNA产量高达50 µg
· 内毒素残留量：内毒素残留量≤0.1 EU/µg，下游可做转染级别实验
· 快速：无需冷热交替，25 min内即可完成提取
本试剂盒适用于1 - 5 ml过夜培养的菌液，采用优化的碱裂解法裂解细胞，通过独特的硅胶膜吸附技术与特殊的溶液，可特异性结合质粒并有效地去除内毒素、蛋白等杂质，整个提取过程仅需25 min。提取的质粒DNA内毒素残留低(≤0.1 EU/μg)，可用于多种细胞的转染及常规的分子实验。
1. 产量高
图1 质粒质量的检测结果
分别使用Vazyme #DC203(简称V) 与市售竞品 (A、B、C、D、E、F、G、H、I)，按照各自流程提取pUC57(高拷贝)和M3K(低拷贝)的质粒，对提取产物进行浓度测定 (图1A、B) 及跑胶检测 (图1C、D)。结果表明，Vazyme #DC203 提取的质粒产量高、完整性好。
2. 内毒素含量低
图2 质粒内毒素残留量的检测结果
分别使用Vazyme #DC203(简称V)与市售竞品 (A、B、C、D、E、F、G、H、I)，按照各自流程提取pUC57(高拷贝)和M3K(低拷贝)的质粒，对提取的产物进行内毒素残留量的测定(图 2A、B)。结果表明，Vazyme #DC203提取的质粒内毒素残留量低，且优于竞品。
3. 快速
图3 DC203操作流程概要
Vazyme #DC203无需冷热交替和内清剂，操作简便快速，全程仅需25 min。
15 ~ 25℃保存
1. 测试的样本类型，投入量以及对应产量？
高拷贝质粒1 - 5 ml产量约10 - 50 μg，低拷贝数的质粒5 - 10 ml产量约2 - 5 μg
2. 质粒DNA 产量低？
1）细菌未充分裂解：确保菌体在Buffer P1中充分重悬，成团的细菌因裂解不充分会降低产量。
2）菌液保存不当：菌种保存过程中存在质粒丢失现象，建议培养细菌前最好先划线或涂布平板活化，以稳定产量。
3）低拷贝质粒或大质粒(>10 kb)：不同质粒载体因拷贝数差异会造成产量有明显的波动。对于低拷贝质粒或大质粒(>10 kb)应加大菌液使用量，使用5 - 10 ml过夜培养的菌液，同时按照比例增加Buffer P1、Buffer P2和Buffer P5的用量，洗脱液应65℃预热，以增加提取效率，其他步骤按说明书。
4）Buffer P2析出：Buffer P2低温时易析出，37℃加热至完全溶解，混匀后
5）菌液培养时间过长：细菌的培养时间不要超过16 h，最好控制在12 - 14 h。
6）宿主菌株差异：不同宿主对质粒产量也会产生影响，建议使用end A-大肠杆菌菌株，如DH5α、TOP10及XL10等。
3. 若产物发现RNA残留？
1）储存温度不当或超出有效期：已加入RNase A的Buffer P1长时间室温放置可能会出现酶活下降，使用后应及时放回2 ~ 8℃。
2）菌液体积过高：由于菌体数量过多，导致Buffer P1中RNase A不足以消化菌体中的RNA，建议减少菌液体积进行实验。
4. 提取的DNA纯度低（即OD260/OD230偏低）？
1）可能是加Buffer P1后未充分重悬菌体，裂解不完全导致产量和纯度偏低；
2）盐离子残留：建议沿吸附柱管壁四周加入Buffer PW2，或加入Buffer PW2后盖盖颠倒混匀2 - 3次，有助于完全冲洗管壁上的盐分；
5. 提取的质粒能否转染293细胞？
可以。
6. DC203提取质粒片段长度的范围？
可兼容至21.5Kb大小的质粒。
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