VAHTS Pathogen DNA&RNA Multiplex PCR Mix
助力病原tNGS准确快检的RT兼容多重扩增试剂
病原微生物检测；环境微生物鉴定；食品安全检测；科学研究（基因功能研究）
· 兼容逆转录体系：逆转录后，无需纯化，可直接进行多重扩增
· 优异的扩增性能：对于不同重数的panel，均展示出优异的检出率、扩增特异性和均一性
· 严格的背景菌质控：生产车间洁净、生产人员专业、质控方案细致，严控背景菌，为病原靶向检测保驾护航
VAHTS Pathogen DNA&RNA Multiplex PCR Mix是针对DNA和RNA病原微生物共检测开发的多重扩增试剂，采用了多种热启动技术搭配精心优化的缓冲，兼容逆转录体系，可实现快速、高特异的多重扩增，适用于靶向扩增子文库构建。本试剂适用的Panel重数为20 - 1000 (Panel GC范围为20% - 85%)。此外，本试剂的原材料经过严格的背景菌质控，可有效预防假阳性的产生，以保证检出结果真实可靠。同时经过严格的质量控制和功能验证，较大程度保证多重扩增反应的稳定性和重复性。
将人293T细胞gDNA和混合病原核酸以1000:1质量比混合构建病原模型（其中，混合病原核酸由17种DNA和RNA病原等质量比混制而成），逆转录后不纯化，取9.5μl逆转录产物通过两轮PCR构建扩增子文库，比较不同多重扩增试剂的性能（分别采用207重和492重病原Panel，快速程序下完成多重扩增）。
如图所示，无论使用207重Panel还是492重Panel，Vazyme #NA312均具有优异的检出率、特异性和均一性。
-30 ~ -15℃保存，≤0℃运输，请勿将本品置于温度高于室温的环境中存放。
Q1：扩增产量偏低
A1：(1) 确认模板是否降解，重新定量模板，确认模板起始量体积是否正确，检查引物是否降解。
(2) 若模板质量较差，可适当提高循环数或使用高质量模板。
(3) 若Panel重数较高时，可通过调节扩增程序，如增加退火和延伸时间。
(4) 降低退火温度(间隔1 ~ 3℃)，必要时进行退火温度梯度测试。
(5) 请确认每一步体系以及程序是否按照说明书进行，并注意每一步骤中各项操作细节。
(6) 产物纯化磁珠干燥环节，不能时间过长导致磁珠过于干燥，过于干燥也会降低产量。
Q2：引物二聚体较高
A2：(1) 可以适当调整引物的使用量。
(2) 可适当提高模板投入量，减少引物间随机结合概率。
(3) 可减少多重扩增后的纯化乘数，纯化乘数可在0.6 × - 1 ×之间调整。
Q3：存在非特异性扩增
A3：(1) 减少循环数。
(2) 提高退火温度。
(3) 减少引物使用量。
(4) 重新设计引物。
Q4：部分区域漏检
A4：(1) 可能设计的Panel与模板的匹配度不够高，建议对设计的Panel进行功能验证。
(2) 可能模板质量较差，部分区域缺失，需重新使用高质量模板。
(3) 可能引物间GC比例或Tm值差异过大，部分区域扩增困难，建议对不符合条件的Panel重新进行调整。
Q5：文库均一度偏低
A5：(1) 较短扩增子较少：可适当提高磁珠纯化乘数(提高至1.2 ×或1.5 ×)。
(2) 较长扩增子较少：原因可能为模板受损严重或PCR环节扩增不充分，请使用高质量模板或将PCR环节中延伸时间延长。
(3) AT含量高的扩增子较少：增加退火时间或降低退火温度，最低可降至55℃。
(4) GC含量高的扩增子较少：可以通过在扩增体系中添加5% - 10% DMSO。
Q6：气溶胶污染
A6：PCR产物极易产生气溶胶污染，进而导致实验结果不准确、可信度不高等问题。因此，我们推荐您将PCR反应体系配制区和PCR产物纯化区进行强制性的物理隔离，使用专用的移液器等设备，并定时对各实验区域进行清洁(使用0.5%次氯酸钠或10%漂白剂进行擦拭清理)，以保证实验结果的可信度。
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