Anti-Akt (pan) Rabbit mAb
特异性好背景干净,WB/IP/IHC/IF全能选手
Western Blotting(WB)、Immunoprecipitation(IP)、Immunofluorescence(IF)、Immunohistochemistry(IHC)
Akt,也被称为蛋白激酶B (PKB),是一种丝氨酸/苏氨酸激酶,是生长因子诱导的细胞存活的关键介质。在哺乳动物基因组中,鉴定出3个Akt基因(Akt1, Akt2和Akt3),Akt的主要亚型由Akt1编码,并调节细胞凋亡。Akt发挥其作用的传统途径是PI3K/Akt信号通路,其在维持细胞正常功能中起重要作用。
1、特异性好:识别位点单一,背景干净
2、灵敏度高:可以检测微量蛋白表达
3、适用范围广:可兼容WB、IP、IF、IHC实验
1.特异性好
RA2101能广泛且特异地识别多种细胞系和组织里Akt水平。
Fig.1 检测不同细胞和组织提取物中的Akt蛋白表达
使用Vazyme #RA2101对不同细胞和组织提取物中的Akt进行蛋白质印迹实验。泳道1:HEK293T细胞裂解液;泳道2:HeLa细胞裂解液;泳道3:3T3-L1细胞裂解液;泳道 4:小鼠肝组织裂解液;泳道5:小鼠脾组织裂解液;泳道6:小鼠棕色脂肪组织裂解液,图片背景干净,条带单一。结果表明,Vazyme #RA2101可特异性的检测不同样本类型中Akt的表达。
2.灵敏度高
293T细胞样本在总蛋白上样量低至1 μg时,仍能检测到目的蛋白。
Fig.2 检测梯度上样的HEK293T细胞提取物中Akt的蛋白表达
使用Vazyme# RA2101对梯度上样HEK293T细胞提取物中的Akt进行蛋白质印迹实验。在总蛋白量低至1 μg的情况下,仍可检测出蛋白表达。结果表明,Vazyme #RA2101灵敏度较高。
3.稳定性强
37℃存放7天、冻融14次仍保持良好性能。
Fig.3 不同处理条件下的抗体对HEK293T细胞提取物中Akt蛋白表达检测
使用不同处理条件下的Vazyme #RA2101对HEK293T细胞提取物中的Akt进行蛋白质印迹实验。不同方式处理后,对Akt蛋白表达的检测情况无明显差异。结果表明,Vazyme #RA2101稳定性较好。
4.应用广泛
免疫沉淀、免疫荧光和免疫组化同样表现稳定。
Fig.4 使用RA2101对HeLa细胞进行免疫沉淀分析。
Fig.5 使用RA2101对HeLa细胞进行免疫荧光分析
Fig.6 使用RA2101对小鼠心脏组织进行免疫组化分析
使用Vazyme #RA2101分别进行免疫沉淀(IP)、免疫荧光(IF)和免疫组化(IHC)的实验分析。不同实验检测数据均阳性信号清晰,背景干净。结果表明,Vazyme #RA2101可满足上述实验对特异性和灵敏度的要求。
-30 ~ -15℃保存,≤0℃运输。
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Q1:单克隆抗体和多克隆抗体的区别是什么?
A1:(1)单克隆抗体:由单个B细胞克隆产生,具有高度特异性,能识别单一抗原表位。生产过程复杂且成本高,但结果一致性好;
(2)多克隆抗体:由多个B细胞克隆产生,能识别同一抗原的多个表位。生产过程简单且成本低,但结果可能有批次间差异。
Q2:抗体的亲和力和特异性是什么?
A2:(1)亲和力:指抗体与抗原结合的强度。高亲和力的抗体能与抗原牢固结合;
(2)特异性:指抗体识别抗原的准确性。高特异性的抗体只与目标抗原结合,不与其他分子发生交叉反应。
Q3:如何保存和使用抗体?
A3:(1)本产品为加甘油的抗体,直接储存在-20℃即可。
(2)为了防止微生物污染,本产品抗体中加入了适当浓度的叠氮化钠。如果要用抗体对活细胞进行染色或处理,或者要用抗体进行体内研究,则不能使用含叠氮化钠的抗体制备物;这种抗菌剂对大部分生物体都有毒害作用。
Q4:如何选择合适的抗体?
A4:(1)特异性:抗体需要特异性地识别目标抗原;
(2)亲和力:抗体应具有高亲和力以确保有效结合;
(3)宿主种类:选择与实验对象匹配的抗体,例如,如果实验对象是小鼠,可以选择来源于小鼠的抗体;
(4)应用类型:不同应用(如Western Blot、ELISA、免疫组化等)可能需要不同的抗体;
(5)验证数据:查看供应商提供的抗体验证数据,确保其在相应的应用中表现良好。
Q5:如何避免抗体的非特异性结合?
A5:(1)特异性:抗体需要特异性地识别目标抗原;
(2)阻断:在加入抗体前用适当的阻断剂(如BSA、奶粉或正常血清)处理样品;
(3)优化稀释度:根据实验需求优化一抗和二抗的稀释比例;
(4)洗涤:增加洗涤步骤和时间,以去除非特异性结合的抗体。
Q6:为什么抗体失活或失效?
A6:(1)储存不当:确保抗体储存在适当的温度下,避免反复冻融;
(2)光照和温度:避免抗体暴露在强光和高温下;
(3)pH和防腐剂:使用适当的储存缓冲液,添加防腐剂如叠氮化钠或甘油。
Q7:如何处理抗体的背景信号?
A7:(1)增加洗涤步骤:增加洗涤时间和次数以减少背景信号;
(2)优化阻断剂:选择合适的阻断剂(如BSA、奶粉、正常血清)以获得更好地实验效果;
(3)调整抗体稀释度:降低一抗和/或二抗的浓度;
(4)使用吸附抗体:选择经过吸附处理的抗体,可以减少与非目标蛋白的交叉反应。
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