Anti-Erk1/2 Rabbit mAb
特异性好背景干净,WB/IP/IHC/IF全能选手
Western Blotting(WB)、Immunoprecipitation(IP)、Immunofluorescence(IF)、Immunohistochemistry(IHC)
Erk有两种亚型:MAPK3/Erk1和MAPK1/Erk2,两者有84%的氨基酸残基相同。Erk为细胞外信号调节激酶,其广泛存在于胞浆中,具有典型的蛋白激酶结构,通过磷酸化底物对细胞生命活动进行调控,该激酶是丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)信号转导系统组成部分之一,在响应多种细胞外刺激的MAPK/Erk级联反应中发挥重要作用。
1、特异性好:识别位点单一,背景干净
2、灵敏度高:可以检测微量蛋白表达
3、适用范围广:可兼容WB、IP、IF、IHC实验
1.特异性好
RA2201在检测Erk1/2敲除细胞样品时具有高度特异性,能够明确区分野生型和敲除样品中的Erk蛋白信号。
Fig.1 检测敲除细胞样品的Erk1/2表达
对HEK293T细胞提取物中的Erk1/2进行蛋白质印迹实验。泳道1:HEK293T总蛋白细胞裂解液;泳道2:HEK293T敲除Erk1细胞裂解液;泳道3:HEK293T敲除Erk2细胞裂解液。结果表明,Vazyme #RA2201可特异性的检测敲除样品中Erk的表达水平。
2.灵敏度高
293T细胞样本在总蛋白上样量低至1 μg时,仍能检测到目的蛋白。
Fig.2 检测梯度上样的HEK293T细胞提取物中Erk的蛋白表达
使用Vazyme# RA2201对梯度上样HEK293T细胞提取物中的Erk进行蛋白质印迹实验。在总蛋白量低至1 μg的情况下,仍可检测出蛋白表达。结果表明,Vazyme #RA2201灵敏度较高。
3.稳定性强
37℃存放7天、冻融14次仍保持良好性能。
Fig.3 不同处理条件的抗体对HEK293T细胞提取物中Erk蛋白表达检测
使用不同加压与冻融处理的Vazyme #RA2201对HEK293T细胞提取物中的Erk进行蛋白质印迹实验。加压与冻融前后,对Erk蛋白表达的检测情况无明显差异。结果表明,Vazyme #RA2201稳定性较好。
4.应用广泛
免疫沉淀、免疫荧光和免疫组化同样表现稳定。
Fig.4 使用RA2201对3T3细胞进行免疫沉淀分析。
Fig.5 使用RA2201对HeLa细胞进行免疫荧光分析
Fig.6 使用RA2201对小鼠肝组织进行免疫组化分析
使用Vazyme #RA2201分别进行免疫沉淀(IP)、免疫荧光(IF)和免疫组化(IHC)的实验分析。不同实验检测数据均阳性信号清晰,背景干净。结果表明,Vazyme #RA2201可满足上述实验对特异性和灵敏度的要求。
-30 ~ -15℃保存,≤0℃运输。
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Q1:单克隆抗体和多克隆抗体的区别是什么?
A1:(1)单克隆抗体:由单个B细胞克隆产生,具有高度特异性,能识别单一抗原表位。生产过程复杂且成本高,但结果一致性好;
(2)多克隆抗体:由多个B细胞克隆产生,能识别同一抗原的多个表位。生产过程简单且成本低,但结果可能有批次间差异。
Q2:抗体的亲和力和特异性是什么?
A2:(1)亲和力:指抗体与抗原结合的强度。高亲和力的抗体能与抗原牢固结合;
(2)特异性:指抗体识别抗原的准确性。高特异性的抗体只与目标抗原结合,不与其他分子发生交叉反应。
Q3:如何保存和使用抗体?
A3:(1)本产品为加甘油的抗体,直接储存在-20℃即可。
(2)为了防止微生物污染,本产品抗体中加入了适当浓度的叠氮化钠。如果要用抗体对活细胞进行染色或处理,或者要用抗体进行体内研究,则不能使用含叠氮化钠的抗体制备物;这种抗菌剂对大部分生物体都有毒害作用。
Q4:如何选择合适的抗体?
A4:(1)特异性:抗体需要特异性地识别目标抗原;
(2)亲和力:抗体应具有高亲和力以确保有效结合;
(3)宿主种类:选择与实验对象匹配的抗体,例如,如果实验对象是小鼠,可以选择来源于小鼠的抗体;
(4)应用类型:不同应用(如Western Blot、ELISA、免疫组化等)可能需要不同的抗体;
(5)验证数据:查看供应商提供的抗体验证数据,确保其在相应的应用中表现良好。
Q5:如何避免抗体的非特异性结合?
A5:(1)特异性:抗体需要特异性地识别目标抗原;
(2)阻断:在加入抗体前用适当的阻断剂(如BSA、奶粉或正常血清)处理样品;
(3)优化稀释度:根据实验需求优化一抗和二抗的稀释比例;
(4)洗涤:增加洗涤步骤和时间,以去除非特异性结合的抗体。
Q6:为什么抗体失活或失效?
A6:(1)储存不当:确保抗体储存在适当的温度下,避免反复冻融;
(2)光照和温度:避免抗体暴露在强光和高温下;
(3) pH和防腐剂:使用适当的储存缓冲液,添加防腐剂如叠氮化钠或甘油。
Q7:如何处理抗体的背景信号?
A7:(1)增加洗涤步骤:增加洗涤时间和次数以减少背景信号;
(2)优化阻断剂:选择合适的阻断剂(如BSA、奶粉、正常血清)以获得更好地实验效果;
(3)调整抗体稀释度:降低一抗和/或二抗的浓度;
(4)使用吸附抗体:选择经过吸附处理的抗体,可以减少与非目标蛋白的交叉反应。
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