FastPure EndoFree Plasmid Midi Kit
无内毒素质粒中量提取试剂盒
高产无内毒，可视化操作，转染级别，15-50 ml质粒中提
质粒DNA提取；产物可用于酶切、PCR、测序、连接转化、转染
本试剂盒适用于提取15 - 50 ml过夜培养的菌液，采用优化的碱裂解法裂解细胞，通过独特的硅胶膜吸附技术与特殊的Buffer ERB和Buffer ERW溶液，可特异性结合质粒并有效地去除内毒素、蛋白、基因组等杂质。同时，添加指示剂的独特P2溶液，可以通过颜色的变化，指示裂解、中和是否充分，保证提取质量，实现可视化操作。提取的质粒DNA内毒素残留低，可适用于多种细胞的转染及各种常规操作，包括酶切、PCR、测序、连接等实验。
高产高纯：50 ml 高拷贝菌液，可获得300 μg质粒
无内毒素：高拷贝质粒内毒素残留≤0.1 EU/μg
可视化操作：显色试剂，展示中和效果，为产物质量保驾护航
1、高产量
2、无内毒
3、可视化操作
注：可视化操作可以规避质粒提取过程中，中和不完全带来的纯度和浓度低的问题
BOX 1：2 ~ 8 ℃保存，根据不同目的地调整运输方式；
常见问题1：质粒DNA产量低
原因1：低拷贝
解决方案：不同质粒载体因拷贝数差异会造成产量有明显的波动。对于低拷贝质粒应加大菌液使用量，使用100 ml过夜培养的菌液，同时按照比例增加Buffer P1、Buffer P2和Buffer P5的用量，洗脱液应65 ℃预热，以增加提取效率，其他步骤相同。低拷贝质粒，例如：pET系列，pWE15，SuperCos，pBR322，pACYC及其衍生载体，pSC101及其衍生载体等
原因2：大片段质粒（＞10kb）
解决方案：洗脱液65 ℃预热，以增加提取效率，其他步骤相同
原因3：宿主菌株差异
解决方案：不同宿主对质粒产量也会产生影响，建议使用end A-大肠杆菌菌株， 如DH5α、TOP10及XL10等
原因4：Buffer P2析出
解决方案：Buffer P2低温时易析出，37 ℃加热至完全溶解，混匀后使用
原因5：菌液保存不当
解决方案：菌种保存过程中存在质粒丢失现象，建议培养细菌前最好先划线或涂布平板活化，以稳定产量
原因6：菌液培养时间过长
解决方案：菌的培养时间不要超过16 h，可控制在12 - 14 h
原因7：吸附柱长时间暴露于高温等不良环境
解决方案：进行08-1/常规提取步骤/步骤6
常见问题2：基因组污染
原因：裂解操作不当
解决方案：加入Buffer P2后，需温和颠倒混匀；处理多个样本时，裂解时间不要超过5 min
常见问题3：纯度低
原因1：盐离子残留
解决方案：用Buffer PW1和Buffer PW2各漂洗1次；建议沿吸附柱管壁四周加入，或加入后颠倒混匀2 - 3次，有助于减少盐离子残留
原因2：乙醇残留
解决方案：空离后可室温开盖放置5 min，尽量去除乙醇残留
常见问题4：内毒素残留高
原因1：加入Buffer P5后未充分混匀
解决方案：加入Buffer P5后应充分混匀至蓝色消失，若蓝色未消失可增加上下颠倒次数至20次，离心后上清应为澄清状
原因2：Buffer ERB析
解决方案：Buffer ERB低温时易析出，37 ℃加热至完全溶解，混匀后使用
原因3：加入Buffer ERB未充分混匀
解决方案：加入Buffer ERB后应充分混匀，可增加上下颠倒次数至15次
常见问题5：RNA残留
原因1：RNase A活性下降
解决方案：已加入RNase A的Buffer P1长时间室温放置可能会出现酶活下降，使用后应及时放回2 ~ 8 ℃
原因2：菌液体积过高
解决方案：由于菌体数量过多(>100 ml)，导致Buffer P1中RNase A不足以消化菌体中的RNA，建议减少菌液体积
常见问题6：吸附柱堵塞
原因：离心机离心力过小
解决方案：不同离心机相同转速对应离心力不同，2,500 × g≤离心力≤8,000 × g
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