FastPure EndoFree Plasmid Mini Plus Kit
无内毒素质粒小中提取试剂盒
减少离心省操作，中和变色保高产的无内毒素质粒小中提
质粒DNA提取；产物可用于酶切、PCR、测序、连接转化、转染
本试剂盒适用于提取5 - 15 ml过夜培养的菌液，采用优化的碱裂解法裂解细胞，通过独特的硅胶 膜吸附技术与特殊的缓冲液系统，可特异性结合质粒并有效地去除内毒素、蛋白等杂质，整个提取过程仅需40 min，方便快捷。添加指示剂的独特P2溶液，通过颜色的变化，指示裂解、中和是否充分，保证提取质量，实现可视化操作。提取的质粒DNA可适用于多种细胞的转染及各种常规 操作，包括酶切、PCR、测序、连接等实验。
简便操作：减少离心次数，缩短实验流程
特高产量：15ml高拷贝菌液，浓度可达1000+ng/ul
无内毒素：低内毒残留，保障下游成功
1.简便操作
前处理颜色指示，裂解充分，中和完全，保障高产量
整体实验流程缩短，离心次数减少
2.特高产量
3.下游安心转
转染1μg-293T细胞
BOX 1：2 ~ 8℃保存，根据不同目的地调整运输方式；
BOX 2：15 ~ 25℃保存，室温运输。
Q1:质粒DNA产量低
原因1：低拷贝质粒
解决方案1：不同质粒载体因拷贝数差异会造成产量有明显的波动。对于低拷贝质粒应加大菌液使用量，使用30ml过夜培养的菌液，同时按照比例增加Buffer P1、Buffer P2和Buffer N3的用量。洗脱液应65℃预热，以增加洗脱效率。低拷贝质粒例如：pET系列，pWE15,SuperCos,pBR322,pACYC及其衍生载体，pSC101及其衍生载体等
原因2：大质粒(>10 kb)
解决方案2：洗脱液应65℃预热，以增加洗脱效率
原因3：宿主菌株差异
解决方案3：不同宿主对质粒产量也会产生影响。建议使用end A大肠杆菌菌株，如DH5a、TOP10及XL10等
原因4：Buffer P2析出
解决方案4：Buffer P2低温时易析出，37℃加热至完全溶解，混匀后使用
原因5：菌液保存不当
解决方案5：甘油菌菌种保存过程中存在质粒丢失现象，建议培养细菌前先划线或涂布平板活化菌种，以稳定产量
原因6：菌液培养时间过长
解决方案6：细菌的培养时间不要超过16h,最好控制在12-14 h
Q2：基因组污染
原因1：裂解操作不当
解决方案1：加入Buffer P2后，需温和颠倒混匀；处理多个样本时，裂解时间不要超过5min
Q3：纯度低
原因1：盐离子残留
解决方案1：建议沿吸附柱管壁四周加入，有助于减少盐离子残留
原因2：乙醇残留
解决方案2：空离后可室温开盖放置5min,去除乙醇残留
Q4：RNA残留
原因1：RNaseA活性下降
解决方案1：已加入RNase A的Buffer P1长时间室温放置可能会出现酶活下降，使用后应及时放回2～8℃
原因2：菌液体积过多
解决方案2：由于菌体数量过多，导致Buffer P1中RNase A不足以消化菌体中的RNA,建议减少菌液体积
原因3：异丙醇加入过多
解决方案3：根据离心后上清液的实际体积加入0.3倍体积异丙醇
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