PVDF Membrane
PVDF膜
高效转印,韧性十足
0.45 μm孔径(E801):PVDF Membrane (0.45 μm)是一种孔径为0.45 μm的聚偏二氟乙烯(Polyvinylidene Fluoride,PVDF)印迹膜,具有疏水性,其均匀的孔隙结构能够结合生物分子,主要用于免疫印迹(Immunoblotting,即Western blot),可以将蛋白质从各种凝胶基质转移到膜上,对于分子量>20 kDa的蛋白质吸附率更高。
0.22 μm孔径(E802):PVDF Membrane (0.22 μm)是一种孔径为0.22 μm的聚偏二氟乙烯(Polyvinylidene Fluoride,PVDF)印迹膜,具有疏水性,其均匀的孔隙结构能够结合生物分子,主要用于免疫印迹(Immunoblotting,即Western blot),可以将蛋白质从各种凝胶基质转移到膜上,对于分子量 <20 kDa的蛋白质吸附率更高。
1.转印效率高
0.45 μm(E801)
使用梯度稀释的293细胞总蛋白样本进行SDS-PAGE,0.45 μm的PVDF膜Vazyme #E801和Supplier A膜 300 mA 2 h转印,分别对Akt(60 kDa)和mTOR(289 kDa)进行Western Blot检测。结果表明,Vazyme #E801最低检测限度与Supplier A一致,均可检测至ng级总蛋白,且蛋白吸附性能优于Supplier A。
0.22 μm(E802)
使用梯度稀释的293细胞总蛋白样本进行SDS-PAGE,0.22 μm的PVDF膜Vazyme #E802和Supplier A膜 200 mA 1.5 h转印,分别对Akt(60 kDa)和Histone H3(15 kDa)进行Western Blot检测。结果表明,Vazyme #E802最低检测限度与Supplier A一致,均可检测至ng级总蛋白,且蛋白吸附性能优于Supplier A。
2.染色兼容广
0.45 μm(E801)
使用梯度稀释的293细胞总蛋白样本进行SDS-PAGE,0.45 μm的PVDF膜Vazyme #E801和Supplier A膜 200 mA 1.5 h转印,分别用丽春红染液与CBB染色液进行染色分析。结果表明,Vazyme #E801与Supplier A均可进行丽春红染色和CBB染色,且染色后条带深浅基本一致。
0.22 μm(E802)
使用梯度稀释的293细胞总蛋白样本进行SDS-PAGE,0.22 μm的PVDF膜Vazyme #E802和Supplier A膜 200 mA 1.5 h转印,分别用丽春红染液与CBB染色液进行染色分析。结果表明,Vazyme #E802与Supplier A均可进行丽春红染色和CBB染色,且染色后条带深浅基本一致。
3.剥离再生性好
0.45 μm(E801)
使用梯度稀释的293细胞总蛋白样本进行SDS-PAGE,0.45 μm的PVDF膜Vazyme #E801和Supplier A膜 200 mA 1.5 h转印,先对Akt(60 kDa)进行Western Blot检测,之后使用抗体剥离液进行膜再生,再生后对β-Actin(42 kDa)进行Western Blot检测。结果表明,Vazyme #E801和Supplier A剥离再生性基本一致。
0.22 μm(E802)
使用梯度稀释的293细胞总蛋白样本进行SDS-PAGE,0.22 μm的PVDF膜Vazyme #E802和Supplier A膜 200 mA 1.5 h转印,先对Histone H3(15 kDa)进行Western Blot检测,之后使用抗体剥离液进行膜再生,再生后对GAPDH(37 kDa)进行Western Blot检测。结果表明,Vazyme #E802剥离再生性优于Supplier A。
15 ~ 25℃保存,室温运输。
Q1:转膜完成后条带消失并未见marker?
A1:(1)电源插反,建议:排查正负电极;
(2)转膜顺序或转膜夹子放反,建议:排查转膜顺序;
(3)若使用的是PVDF膜,要考虑转膜前是否使用无水甲醇进行了活化。
Q2:marker条带完整但模糊?条带不完整、倾斜甚至“漂移”?
A2:(1)电流过大导致转膜液过热,建议:将转膜液预冷或转膜之前内外槽加冰;
(2)有残留甲醇,建议:用甲醇激活后,将膜置于转膜液中进行平衡,去除残余甲醇;
(3)“三明治”结构太厚,建议:减少滤纸使用张数。
Q3:marker或特异性条带有气泡或条带不全?
A3:膜和胶之间气泡未排净,转膜时排净膜和胶之间的气泡;
Q4:条带信号弱?或者小条带在膜上,大条带在胶上?
A4:(1)转印效率低,建议:延长转膜时间或更换新的转膜液;
(2)出现不均匀转膜,表示膜没有经过充分的浸润平衡,需要延长膜在转膜缓冲液中的平衡时间。
Q5:大条带在膜上,小条带消失?
A5:(1)转膜电压太高或时间过长,减低电压,减少转膜时间;
(2)膜的孔径不合适,要根据蛋白大小选择合适孔径的膜(0.2μm或更小);
(3)蛋白与膜的结合不强,可以选择结合能力更强的PVDF膜。
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