SuperPico ECL Master Mix
即用型升级高敏ECL发光液
合二为一,一步到位狙击低pg级蛋白
免疫印迹检测
SuperPico ECL Master Mix以化学发光方法检测蛋白质或核酸类生物大分子,可通过辣根过氧化物酶(HRP)实现目的蛋白或核酸的免疫印迹检测。本产品为新型单组分即用型试剂,突破了发光液使用前需要A液和B液等体积混匀的传统模式,操作更加便捷,有效避免吸液中的试剂损耗和交叉污染,提高了结果的一致性和重复性。此外,SuperPico ECL Master Mix可检测低pg级的微量蛋白且荧光持续时间长。印迹膜(如NC、PVDF)经过ECL工作液孵育后,可用X光胶片曝光,也可以直接进行CCD扫描拍照。
操作便捷:即用即取,减少污染
高灵敏度:可检测低pg级蛋白
荧光持续时间长:可曝光显影的时间达5h
强稳定性:25℃可放置1个月
1、高灵敏度
选择梯度稀释的293细胞样本进行SDS-PAGE,用Vazyme #E432、即用型Supplier A、传统型Supplier B三款显影液分别进行自动曝光。成像结果显示,Vazyme #E432最低检测限与Supplier A、Supplier B一致,且自动曝光时间显著优于Supplier A。
选择梯度稀释的293细胞样本进行SDS-PAGE,用Vazyme #E432、即用型Supplier A两款显影液进行同时曝光。成像结果显示,Vazyme #E432最低检测限优于Supplier A。
2、荧光持续时间长
选择梯度稀释的293细胞样本进行SDS-PAGE,将Vazyme #E432、即用型Supplier A、传统型Supplier B与膜共孵育1min后,于0h,1h,3h及5h后分别进行自动曝光。成像结果显示,Vazyme #E432荧光持续时间与Supplier A、Supplier B一致,5 h后条带仍然能保持完整性。
3、强稳定性
将Vazyme #E432和即用型Supplier A分别于不同温度条件下(25℃和50℃)进行加压处理,成像结果显示,25℃加压1个月后E432性能无显著变化,50℃加压1天后,E432最低检测限和自动曝光时间显著优于Supplier A,因而Vazyme #E432具有强稳定性,优于Supplier A。
2 ~ 8℃避光保存,冰袋运输。
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Q1:膜上没有信号
A1:(1)没有Marker或条带很弱,建议更换转膜液、排查正负电极或者转膜顺序是否正确;
(2)Marker正常:
①样本中无目的蛋白,建议换不同类型样本;
②蛋白被降解或本身丰度低,建议加入蛋白酶抑制剂或增加蛋白上样量;
③抗体不能识别目的蛋白或稀释比例过高,需确定该抗体是否适用于Western blot或提高抗体使用比例。
Q2:条带过曝或过粗
A2:(1)降低蛋白上样量或抗体使用浓度;
(2)减少ECL发光液用量或曝光时间。
Q3:显影背景深or背景脏
A3:(1)封闭不充分,建议延长封闭时间或新配制封闭液;
(2)一抗浓度过高,可提高一抗稀释比例;
(3)洗膜不彻底,建议延长洗膜时间或增加去垢剂强度;
(4)抗体与封闭剂出现交叉反应,检测一抗、二抗与封闭剂是否有交叉反应。
Q4:荧光出现淬灭
A4:(1)缓冲液出现杂质或污染,建议更换新的洗膜液;
(2)显影的膜变干燥,建议缩短操作时间或使用X光胶片。
Q5:灵敏度不足
A5:(1)延长孵育时间:排除并非抗体效价过低问题后,若显影后发现灵敏度不足可延长发光液孵育时间至2-3min;
(2)更换超敏发光液:E432灵敏度为低pg级,若目的蛋白为fg级痕量蛋白可更换为超敏发光液如SuperFemto ECL Master Mix (#E433)。
Q6:荧光失效时间短
A6:(1)发光液本身接触膜后处于不断被消耗的过程,建议由大体积配制显影多张膜改为少量多次滴加至每张膜,可保证实验结果的一致性和重复性。
(2)若滴加显影液后进行多次曝光发现信号出现衰减现象,可补充滴加新的显影液进行再次拍照成像。
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