VAMNE Magnetic Pathogen DNA/RNA Kit（KF Prepackaged)
不再繁复，自动化实现病原微生物DNA/RNA共提取
PCR、Real-Time PCR、宏基因组文库构建、DNA/RNA共建库等
· 兼容：兼容血清、血浆、肺泡灌洗液、痰液和拭子等临床生物液体样本
· 共提：同时提取病原微生物的DNA和RNA
· 快速：高通量且1 h内可完成所有流程
· 洁净：严格把控背景菌污染
本试剂盒适用于从生物液体样本(肺泡灌洗液、痰液、脑脊液、拭子液、血清、血浆等)中分离纯化DNA和RNA。试剂盒采用化学法与机械法相结合的裂解方法，能够高效裂解细胞壁较厚的细菌或真菌类样本。本试剂盒中使用的高亲和力硅基磁珠，可在高盐缓冲液作用下，通过氢键和静电吸附核酸，经过漂洗去除多余的蛋白质和盐；在低盐洗脱液或Nuclease-free ddH2O作用下，磁珠释放核酸，从而达到快速分离纯化核酸的目的。本试剂盒匹配的全自动核酸提取仪(Thermo #KingFisher Flex)利用磁珠吸附原理，通过特制的磁棒吸附、转移和释放磁珠，实现磁珠/核酸的转移，自动完成核酸的提取和纯化。本试剂盒分离的DNA和RNA适用于多种下游应用，包括PCR、Real-Time PCR、宏基因组文库构建、DNA/RNA共建库等。
1. 高检出
分别在不同样本类型中掺入103 CFU的细菌、真菌和滴度为10 TCID50 的PRV、200 TCID50 的PRRSV，参照Vazyme #RM602、Vazyme #RM603、Supplier A和Supplier B同类产品的实验流程进行微生物核酸提取，使用qPCR法对提取得到的微生物核酸进行定量，检测的平均Ct值越低，表示检出率越高。结果表明：Vazyme #RM602和Vazyme #RM603对不同样本中不同微生物的检出效果优于Supplier A和Supplier B同类产品。
图1. 提取产物qPCR定量结果
在一定量的HEK293细胞中掺入不同起始量的病原，参照Vazyme #RM602、Vazyme #RM603、Supplier A和Supplier B同类产品的实验流程进行微生物核酸提取。随后对提取产物中病原微生物含量进行mNGS、tNGS检测。结果表明Vazyme #RM602和Vazyme #RM603对不同种类病原微生物的检出Reads数均优于Supplier A和Supplier B同类产品。
图2. 不同微生物检出Reads数-mNGS
图3. 不同微生物检出Reads数-tNGS
2. 高回收率
在400 μl人血浆样本中分别掺入200 ng DNA小片段（70 bp）和200 ng RNA小片段（107 nt），参照Vazyme #RM602、Vazyme #RM603的实验流程进行微生物核酸提取,通过Qubit计算游离核酸回收率。结果表明Vazyme #RM602和Vazyme #RM603在血浆样本上均有良好的游离核酸提取效率。
图4. 血浆游离核酸回收率结果
1、RM603能提全血吗？
A：RM603不兼容全血。
2、RM603能兼容组织样本吗？
A：未测试，理论上如果是研磨后的组织样本，是可以兼容的。
3、RM602/RM603试剂组分一样吗？
A：不一样。
4、其他的核酸提取仪只要加热槽同类型就能够适配RM603吗？
A：程序可能需做相应调试。
5、我们如何防交叉污染？
A：1、耗材设计：2 ml深孔板加样体积不超过1.2 ml；2、提取前：75%乙醇擦拭仪器，紫外照射30min；3、样本前处理后转移上清时，加样应将枪头伸入液面下方加样。
6、所用磁珠修饰基团是什么？
A：硅羟基。
7、共提全流程如何防止RNA降解？
A：1、试剂耗材经过工艺处理，无菌无酶；2、提取前：75%乙醇擦拭仪器，紫外照射30min；3、裂解结合Buffer中的盐组分能够抑制RNA酶的活性。
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