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FreeZol Reagent

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FreeZol Reagent

室温RNA提取试剂升级，高兼容高产量，低毒更安心

RNA提取，产物可用于RT-PCR、qRT-PCR、Northern Blot、Dot Blot、体外翻译和高通量测序等分子生物学实验

1）安全低毒：无需使用氯仿等有毒试剂

2）操作简便：全程室温操作，无需使用冷冻离心机

3）高质量RNA：从各类细胞和动物组织中提取的RNA产量、纯度高

FreeZol Reagent 广泛适用于从培养细胞、动物组织、简单植物组织等样本中提取 Total RNA。与传统 Trizol 法相比，本产品使用方法简单，全程常温操作，且无需使用氯仿进行分层。此外，本产品将蛋白质、DNA、多糖等杂质沉淀至管底，RNA 分布在上层溶液中，可有效去除杂质，保证了提取的 RNA 完整性和纯度。在 1 h 内即可完成全部的提取过程，获得的 Total RNA 可以直接用于 RT-PCR、qRT-PCR、Northern Blot、Dot Blot、体外翻译和高通量测序等各种分子生物学实验。

1）操作简便

图1 R711与常规Trizol操作流程对比图

2）RNA产量高、完整性好

分别使用 Vazyme #R711与其他同类产品（A、B—常规 Trizol，Vazyme #R701）提取大鼠肾脏、脾脏、HepG2和SP2/0细胞，并对RNA产物进行浓度测定和琼脂糖凝胶电泳检测（图2）。结果表明，Vazyme #R711提取的RNA产量和完整性均较好。

图2 对不同动物组织和细胞提取RNA性能展示

3）广泛的细胞和动物组织兼容性

使用 Vazyme #R711对不同动物组织（包括水产和昆虫）、培养细胞进行RNA提取，并对产物进行琼脂糖凝胶电泳检测（图3）。结果显示，Vazyme #R711对各类样本具有广泛的兼容性。

注：R表示大鼠。（例如，R-脑为大鼠脑组织）

图3 不同样本RNA提取产物电泳图

2 ~ 8℃保存，根据不同目的地调整运输方式。

无

VeZol Reagent

Q1：R711相比R701升级了什么？区别是？

A：1、兼容性更广，相比R701能兼容更多的动物组织和细胞（包括肾脏、肺脏、胰腺等样本）；2、产量更高，相比于R701主要体现在动物组织和细胞；3、纯度更好，相比于R701，OD260/230的比值整体都更高；4、操作更加便利，相比于R701加水后有明显分层，加入异丙醇离心后沉淀更明显。

Q2：加入异丙醇离心后看不见沉淀？

A：通常情况下，经过异丙醇沉淀可以看见白色胶状沉淀。若遇到沉淀不可见的情况，可能是RNA含量低或者组织投入量过低，建议加大投入量；且在08-2步骤5进行弃上清操作时，请采用吸取而不是倾倒的方法，以免沉淀丢失；取上层溶液，加5-10 μg RNase-free糖原作为载体与RNA共沉淀。此外，部分组织材料由于含有较多的代谢产物，导致沉淀不能聚集而分散在离心管壁上，此时，请沿液面缓慢吸取上清，经过75%的乙醇清洗RNA沉淀之后，白色团块状沉淀会聚集和明显。

Q3：如何保存组织样本？

A：如果不能立刻提取RNA，应将组织离体后迅速投入液氮冷冻，并用液氮保存；或液氮速冻后，转移至-85 ~ -65℃保存。不能直接将新鲜组织放在-85 ~ -65℃冷冻，因为样品的冻结是一个缓慢的过程，在这个过程中内源RNase会将RNA降解。此外，针对不具备液氮速冻条件的情况，可将新鲜组织充分浸泡在RNA Keeper Tissue Stabilizer (Vazyme #R501)中，在室温可存放一周，2 ~8℃存放一个月，或在-30 ~ -15℃/-85 ~ -65℃长期保存。

Q4：出现污染？

A：1、基因组污染：建议减少样本起始投入量；增加FreeZol Reagent体积；吸取上清溶液时注意不要吸到下层有机相；部分植物样本在使用辅助剂时会出现基因组残留；在样本裂解时，加适量HAc(每500 μl FreeZol Rengent加5 μl)。2、蛋白质污染：提取产物OD260/OD280 偏低时，提示可能存在蛋白质污染。遇到此种情况，需要考虑是否组织投入量过大，导致裂解不充分，可以适当增加FreeZol Reagent或者降低组织投入量进行提取。3、多糖污染：适当延长RNA晾干时间。4、脂肪污染：选择说明书08-1(可选)步骤3之后，转移澄清中间层进行下一步操作。5、盐残留：吸取上清溶液时注意不要吸到下层有机相，增加75%乙醇漂洗次数。

Q5：R711加入稀释液之后是否有分层？

A：有，加入稀释液振荡离心后，可以明显看到明显分层，杂质沉淀在管底，上层溶液澄清透明。

Q6：R711提取出来的Total RNA包括miRNA吗？

A：包括。

无

VeZol Reagent

FreeZol Reagent-R711-R711说明书-V23.1