VeZol Reagent
经典的传统Trizol，助力高质量RNA提取
RNA提取，产物可用于RT-PCR、qRT-PCR、Northern Blot、Dot Blot、体外翻译和高通量测序等分子生物学实验
高兼容：适用于多种细胞、动物组织、植物样本的RNA提取
高产量：裂解能力强，能获得更多的RNA
VeZol Reagent适用于从多种培养细胞、动物组织、植物组织等样本中分离出高质量的Total RNA。VeZol Reagent是基于苯酚和异硫氰酸胍组成的单相溶液，搭配优化后的专有成分，裂解样本和抑制RNase能力更强。VeZol Reagent快速裂解样本，经氯仿抽提后，分为上清层(含RNA)、中间层和红色的有机层，用异丙醇沉淀、乙醇洗涤得到产量和纯度高的Total RNA。获得的Total RNA可以直接用于RT-PCR、qRT-PCR、Northern Blot、Dot Blot、体外翻译和高通量测序等分子生物学实验。
1. 样本适用范围广
使用Vazyme #R411对不同动物组织（包括水产、昆虫）、培养细胞、简单植物和大型真菌样本进行RNA提取，并对产物进行琼脂糖凝胶电泳检测（图1），结果显示Vazyme #R411对多种类型的样本均具有广泛的兼容性。
注：R表示大鼠。（例如，R-肝脏为大鼠肝脏组织）
图1 不同样本提取产物电泳图
2.提取产量高
使用Vazyme #R411与其他同类产品（分别来自A、B公司，Vazyme #R401），对不同动物组织和培养细胞进行总RNA提取，并进行浓度测定和琼脂糖凝胶电泳检测（图2）。结果表明，Vazyme #R411提取的RNA产量和完整性均较好。
图2 不同产品对动物组织和细胞RNA提取性能展示
3.下游适用性强
使用Vazyme #R411与A公司相关产品提取293细胞RNA，qPCR检测mRNA（β-actin）和miRNA(U6）的表达。结果说明，Vazyme #R411可较好的应用于下游定量实验（图3）。
图3 不同产品提取293细胞RNA qPCR定量结果
|
组分 |
R411-01 |
R411-02 |
|
VeZol Reagent |
100 ml |
200 ml |
2 ~ 8℃避光保存，室温运输。
Q1：R411相比R401升级点有哪些？
A：1）兼容性更广：相比R401能兼容更多的动、植物组织；
2）产量更高：相比于R401产量有效提升；
3）纯度更好：相比于R401复杂样本下游Ct检出较好；
4）完整度更好：对于杂质/RNase含量高的样本提取RNA完整度比R401更好；
5）操作体验更佳：贴壁细胞裂解能力提升，颜色比R401更显著。
Q2：RNA得率低？
A: 1）样本裂解或匀浆不充分：减少样本投入量，或将组织样本切成小块，充分研磨或匀浆，以确保完全裂解。
2）RNA沉淀未完全溶解：可在55 ~ 60℃的水浴中孵育10 - 15 min促进RNA沉淀的溶解。
Q3：RNA发生降解？
A: 1）存在RNase污染：
a. 确保所有提取试剂和器具未被RNase污染，耐高温器具可于150℃烘烤4 - 6 h以去除RNase，其它器具可用0.1%的DEPC水浸泡过夜；
b. 做好防护工作，戴口罩和一次性干净手套，并在单独的洁净区操作。
2）样本保存或处理不当：
a. 若不能立即提取，应将离体组织迅速投入液氮冷冻，并用液氮保存；或液氮速冻后，转移至-85 ~ -65℃保存。不要直接将组织放在-85 ~ -65℃冷冻，速冻过程缓慢，内源RNase可能会将RNA降解；
b. 针对不具备液氮速冻条件的情况，可将新鲜组织充分浸泡在RNA Keeper Tissue Stabilizer (Vazyme #R501)中，室温可存放一周，2 ~ 8℃存放一个月，-30 ~ -15℃(或-85 ~ -65℃)长期保存；
c. 样本取出后立即加入VeZol Reagent，并迅速进行后续操作，避免内源RNase降解RNA。
3）样本内源RNase含量高：
a. 减少样本投入量；
b. 采用液氮研磨的处理方式，过程中样本始终保持超低温；
c. 使用2 ~ 8℃预冷的VeZol Reagent进行样本裂解。
4）RNA产物保存不当：取少量样本检测，其余分装后在-85 ~ -65℃保存。电泳检测可提高电压并缩短电泳时间(建议220 V，10 min)，同时对电泳缓冲液冰浴降温，防止电泳过程中RNA发生降解。
Q4：有基因组污染？
A: 1）离心温度不当：加入氯仿后，需在低温(2 ~ 8℃)下高速离心。
2）取水相操作不当：吸取水相需小心，可适当保留，切勿吸到中间层和下层，避免基因组污染。
3）样本含有丰富的基因组：样本裂解后按1 ml VeZol Reagent加入5 µl冰醋酸混匀，进行后续操作。
Q5：提取的样本纯度低？
A：1）杂质、盐离子残留：
a. 增加75%乙醇(用RNase-free ddH2O配制)洗涤沉淀的次数；
b. 在异丙醇和75%乙醇洗涤后尽可能弃尽上清。
2）产量过低会导致OD260/OD230偏低。建议按照说明书建议优化提取流程提高产量。
Q6：加入异丙醇离心后看不见沉淀？
A：1）RNA含量低或组织投入量过低：
a. 取上层水相，加5 - 10 µg RNase-free糖原作为载体与RNA共沉淀；
b. 加入异丙醇后，可2 ~ 8℃或-30 ~ -15℃放置10 - 30 min后离心，且在异丙醇和75%乙醇洗涤后弃上清时，请勿倒掉或吸走RNA沉淀。
2）样本中含较多的代谢产物：由于部分组织样本含较多代谢产物，导致沉淀不能聚集而分散在离心管壁上，此时，请沿液面缓慢吸取上清，防止倒掉或吸走RNA沉淀。
Q7：R411可以在哪些步骤暂停保存？
A：R411样本加Trizol/加氯仿后：在-80℃、-20℃可保存一个月，4℃可保存两周；取上清/加异丙醇/加75%乙醇后：在-80℃、-20℃、4℃可保存一个月。不建议在Trizol流程中的关键节点将样本长期放置于室温（25-37℃），有RNA降解的风险。
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