HiScript IV 1st Strand cDNA Synthesis Kit(+gDNA wiper)
“All-round” 效率与速度并存的cDNA一链合成试剂盒
逆转录；第一链cDNA合成（含gDNA去除）；PCR；qPCR
HiScript IV 1st Strand cDNA Synthesis Kit (+gDNA wiper)是HiScript系列第四代一链cDNA合成试剂，可使用Total RNA或Poly A+ RNA为模板合成第一链cDNA。相较于前代产品，HiScript IV 1st Strand cDNA Synthesis Kit (+gDNA wiper)进一步提升了逆转录效率：包括更强的延伸能力、更快的反应速度以及更高的抑制物耐受程度，尤其适合下游qPCR定量反应和长片段cDNA扩增。本产品提前预混了HiScript IV RTase、RNase inhibitor、dNTP Mix等，使用时只需要根据下游实验添加适当的逆转录引物。本试剂盒提供基因组去除模块，试剂盒中的5 × gDNA wiper Mix 可在42℃，2 min条件下快速去除基因组DNA污染，保证实验数据真实可靠。
更强的延伸能力：R412逆转后可扩增出长达15 kb的长片段cDNA
更高的逆转录效率：与市售其他逆转录试剂相比，R412可得到更小的CT值
更快的反应速度：5 min完成逆转录反应
1. 更强的延伸能力
以 293T细胞总RNA为模板，使用Vazyme #R412、Vazyme #R312及市售其他逆转录产品（SupplierA、B）按照相同时间进行逆转录反应，将得到的cDNA使用2 × Vazyme LAmp Master Mix (Dye Plus)(Vazyme #P312)扩增不同片段长度的目的片段。从图中可以看出，测试的逆转录酶均可以合成9.9 kb的cDNA片段，而合成15 kb的cDNA片段时，R412相较于R312拥有更高的cDNA产量，且明显优于SupplierA、B相关逆转录产品。
2. 更高的逆转录效率
以100 ng的动物细胞，动物组织及植物组织RNA为模板，使用Vazyme #R412、Vazyme #R423、Vazyme #R312及市售其他逆转录试剂（SupplierA、B)，按照各自说明书推荐程序进行逆转录反应，将得到的cDNA进行多个基因的qPCR定量分析，从图中可以看出Vazyme#R412与Vazyme #R423在不同的测试体系下都获得了更低的CT值，超过了Vazyme #R312及SupplierA、B相关逆转录产品。
注：△CT = CT （各品牌逆转录产品） – CT （Vazyme #R412）
3. 更快的反应速度
以293T细胞总RNA为模板，使用Vazyme #R412、Vazyme #R312及市售其他逆转录产品（SupplierA、B）按照说明书程序使用不同的逆转录时间（5 min、10 min、15 min、30 min）逆转录反应，cDNA产物使用P312扩增9.9 kb目标片段。从图中可以看出，大多数逆转录酶在30 min的逆转时间下可以有效扩增9.9 kb的cDNA条带，然而逆转录时间为5 min时，R412依然表现出良好的逆转录效率，优于Vazyme #R312及SupplierA、B相关逆转录产品。
- 30 ~ -15℃保存，≤0℃运输。
Q1：后续实验为PCR时，逆转录时间可以延长吗？
A1：后续实验为PCR时，cDNA的产量与反应时长有关，R412可以在5min合成15kb的cDNA片段，增加反应时间可以提升cDNA的产量。
Q2：后续实验为PCR时，反应温度为50℃？
A2：R412中逆转录酶的适宜反应温度在37~50℃之间。针对全长cDNA的逆转，50℃有助于模板内复杂二级结构的打开。
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