Fast Western Blot Antibody Stripping Buffer
快速抗体剥离液
干净剥离,省时省样,轻松实现一膜多检
本产品适用于Western Blot实验,从PVDF膜或NC膜上剥离一抗和二抗。
Fast Western Blot Antibody Stripping Buffer (快速抗体剥离液/蛋白印迹膜再生液)能够高效特异地从印迹膜(PVDF膜或NC膜)上剥离一抗和二抗,且作用温和,不影响印迹膜上结合的靶蛋白。无需反复电泳和转膜等步骤,同一张膜可以实现多次蛋白检测,既避免珍贵样本浪费又节省时间,显著提高蛋白Western Blot检测效率。本产品在使用过程中,无毒、无刺激性气味、无需加热,也无需特殊设备。
高效温和:剥离效果好且不影响抗原蛋白,同一张膜可实现多次剥离检测
操作便捷:无需特殊设备、无需重复电泳、封闭
安全性高:无刺激性气味
兼容性广:适用于PVDF膜和NC膜
1、高效
图1. 使用不同蛋白检测剥离液对印迹膜剥离的效果
使用 293 细胞样本进行SDS-PAGE,并免疫印迹检测Erk蛋白,使用Vazyme #E701与Supplier A、Supplier B进行剥离20 min,再孵育检测Lamin B蛋白,再次剥离20 min后,孵育检测Caspase 3蛋白。两次剥离检测结果表明,Vazyme #E701对不同蛋白的剥离效果显著优于Supplier A、Supplier B,且对印迹膜上蛋白无显著损伤。
2.温和
图2. 长时间(多次)剥离对印迹膜蛋白损失结果检测
使用 293 细胞样本进行SDS-PAGE,并免疫印迹检测Erk蛋白,使用Vazyme #E701与Supplier B进行剥离8 h(相当于剥离24次,20 min/次)后,孵育Caspase 3抗体,剥离检测结果显示,Vazyme #E701对印迹膜上结合的蛋白损伤小,可在同一张膜上实现长时间(多次)剥离。
2 ~ 8℃保存,冰袋运输。
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Q1:剥离时间多少合适,剥离不干净怎么办?
A1:经对比测试,在相同剥离时间下,E701的剥离能力具有更大的优势,剥离时间建议根据蛋白丰度进行调整:
① 如果蛋白丰度相对较低,剥离10-20 min即可完全剥离;② 在上样量过高或者蛋白表达过高的情况下延长时间20~40min也可以实现完全的剥离,且长时间的剥离对膜上蛋白的影响很小。
Q2:剥离结束清洗后,还需要再次封闭吗?不封闭会不会导致背景脏?
A2:E701剥离结束清洗后,无需再次封闭,直接进行下一轮免疫印迹,孵育一抗即可。
Q3:使用E701剥离,印迹膜可以一直剥离吗?可以剥离多少次?
A3:经测试,持续剥离8 h(约24次,20 min/次)后,对低丰度蛋白进行检测,蛋白条带依然很清晰,所以在保证剥离过程中印迹膜没有损坏或者干燥的情况下,可以实现持续的剥离。
Q4:E701剥离过程中,印迹膜颜色变淡是否为正常现象
A4::剥离过程中,印迹膜颜色会变淡,此为正常现象,洗涤后即可恢复正常。
Q5:抗体剥离液可以重复使用吗
A5:考虑到剥离效果及时间,本产品不建议重复使用。
Q6:剥离后,NC膜上蛋白损失情况比PVDF膜高
A6:本品适用于NC膜和PVDF膜,推荐使用PVDF膜,剥离效果更佳,PVDF膜与蛋白结合作用是NC的6倍,因此使用NC膜剥离的时候,可以减少剥离时间,这样剥离效果显著的同时,膜蛋白损失更小。
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